Homogenisieren Sie die Korallenprobe mit einem mechanischen Sägezahnhomogenisator für eine Minute, bis die Probe vollständig homogenisiert ist und keine Klumpen mehr sichtbar sind. Für die Normalisierung wird ein Ein-Milliliter-Aliquot aus dem homogenisierten Gewebe für die Symbiodiniaceae-Zellzahl, die Analyse des Proteingehalts des Korallengewebes und die Chlorophyll-A-Schätzung entnommen. Bei der Trennung von Wirtsmaterial und Algenzellen zentrifugiert man das verbleibende Korallenhomogenat bei 2.500 G fünf Minuten lang bei vier Grad Celsius.
Den Überstand, der das Wirtsmaterial enthält, in ein neues 15-Milliliter-Röhrchen überführen. Geben Sie zwei Milliliter kaltes, hochreines Wasser in das Algenpellet und wirbeln Sie sowohl das Wirtsmaterial als auch das Algenpellet zwei Minuten lang vor, um es zu resuspendieren. Zentrifugieren Sie alle Proben erneut und überführen Sie den Überstand, der das Wirtsmaterial enthält, in ein neues 15-Milliliter-Röhrchen.
Nachdem Sie den Überstand aus dem Algenpellet entfernt haben, bewahren Sie das Pellet im ursprünglichen 15-Milliliter-Röhrchen auf. Brise entweder das Holobion-Homogenat oder den abgetrennten Wirt in Symbiodiniaceae-Fraktionen bei minus 80 Grad Celsius für mindestens zwei Stunden. Anschließend werden die Proben über Nacht mit einem 0,01-Millibar-Vakuum bei minus 85 Grad Celsius lyophilisiert.
Nach dem Trocknen wird jede Probe auf einer Laborwaage in separate, weichmacherfreie Zwei-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen gewogen. Die mikroskopische Visualisierung zeigte nach drei Waschschritten keine Symbiodiniaceae-Zellen in Wirtsgewebeproben. In ähnlicher Weise wurde minimales Wirtsgewebe in Symbiontenfraktionen gefunden.
Das Holobiont-Homogenat deutete jedoch darauf hin, dass intrazelluläre Symbiodiniaceae nicht durch einfaches Airbrushen aus ihren Symbiosomen befreit worden waren.
