Entfernen Sie das PBST und tauchen Sie die Paraformaldehyd-fixierten Drosophila-Larvenkadaver für 40 Minuten bei Raumtemperatur in ein Blockiermittel. Ersetzen Sie das Blockierungsmittel durch 200 Mikroliter des Primärantikörpers, verdünnt mit 0,2 % PBST. Lassen Sie die Larven über Nacht bei vier Grad Celsius inkubieren.
Waschen Sie die Larven am nächsten Tag 10 Minuten lang mit 0,2 % PBST. Als nächstes entfernen Sie das PBST aus dem Röhrchen und fügen Sie 200 Mikroliter verdünnten sekundären Antikörper hinzu. Bei Raumtemperatur 1,5 Stunden im Dunkeln inkubieren.
Geben Sie einen Kernfarbstoff wie TO-PRO R3-Iodid für 30 Minuten in das Inkubationsröhrchen, während Sie die Mikrotubuli im Dunkeln färben. Zum Schluss spülen Sie den sekundären Antikörper und den Kernfarbstoff mit 0,2 % PBST 10 Minuten lang ab.
