Zu Beginn zentrifugieren Sie die isolierten CD34-positiven Zellen und resuspendieren das Zellpellet in 300 Mikroliter vorgewärmtem SFM-34-Medium, das mit gemischten 4 Zytokinen ergänzt wird, und zählen Sie die Zellen mit 10 Mikrolitern der Zellsuspension. Nach dem Zählen und Resuspendieren der Zellen in einem Endvolumen von 150 Mikrolitern Zytokin-ergänztem SFM-34 fügen Sie 0,5 Mikroliter ROCK-Inhibitor hinzu. Saugen Sie das Laminin langsam aus den Fluidik-Chips ab, indem Sie die Spitze einer P200-Pipette in das Reservoir am Rand des Kanals legen.
Geben Sie dann die Zellsuspension gleichmäßig in den Kanal und stellen Sie sicher, dass sich keine Blasen bilden. Inkubieren Sie den Chip über Nacht bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid, um die Zellen vollständig mit dem Kanal zu verbinden. Wenn die Endothelzellen vollständig anhaften, saugen Sie das Medium wie zuvor beschrieben ab.
Geben Sie 200 Mikroliter Zytokin-ergänztes SFM-34 in den Chip. Tauschen Sie das Medium täglich aus, bis die Zellen eine Konfluenz von 90 bis 100 % erreicht haben.
