Mischen Sie zunächst die blaue Weichgelpaste Lebensmittelfarbe mit destilliertem Wasser. Erhitzen Sie die Fläschchen mit Standard-Maismehl-Agar-Futter in der Mikrowelle, bis das Lebensmittel zu einer Flüssigkeit geschmolzen ist. Geben Sie die Farbstoffmischung in jede Durchstechflasche mit Lebensmitteln und mischen Sie sie gut, bis die Lebensmittel homogen blau sind.
Fügen Sie eine Menge blauer Farbstoffmischung hinzu, um die Farbe der Lebensmittel zu sättigen und sicherzustellen, dass es keine Farbabweichungen zwischen den Durchstechflaschen gibt. Legen Sie während des Trocknens ein dünnes Papiertuch über die Öffnungen der Durchstechflasche, um zu verhindern, dass verirrte Fliegen in der Durchstechflasche landen. Sobald das Futter abgekühlt und verfestigt ist, geben Sie die Fliegen in das blaue Futter, das das Fläschchen enthält.
Bebrüten Sie die Fläschchen mit Fliegen über Nacht bei 25 Grad Celsius. Am nächsten Tag werden die Fliegen in Fläschchen mit Standardfutter von Drosophila umgefüllt und jede Durchstechflasche nummeriert. Die Fliegen 60 Minuten lang bei 25 Grad Celsius bebrüten.
Nach der Inkubation werden die Fliegen in neue Fläschchen mit Standardfutter von Drosophila umgefüllt. Ziehen Sie eine gestrichelte Linie entlang der Länge des Fläschchens, um den Startpunkt für die Zählung zu markieren. Zählen Sie manuell die kleinen, runden, undurchsichtigen und farblosen Punkte an der Wand jedes Fläschchens.
Notieren Sie das Verhältnis der blauen Punkte zur Gesamtzahl der Punkte für jede Durchstechflasche. Bei Kontrollfliegen wird die blaue Nahrung relativ schnell ausgeschieden, während bei Alpha-Synuclein-Fliegen die blaue Nahrung bis zu acht Stunden im Darm verbleibt. Am Tag 10 nach der Exlosion, wenn die Alpha-Synuclein-Fliegen einen robusten neurodegenerativen Phänotyp aufweisen, wurden signifikante Unterschiede in der Darmtransitzeit im Vergleich zu Kontrollfliegen beobachtet.
Es wurden jedoch keine Unterschiede in der Darmpassage zwischen Kontroll- und Alpha-Synuclein-Fliegen am ersten Tag nach der Eklosion beobachtet.
