Schneiden Sie zunächst mit einer Hochleistungsschere das Kappenende 0,5 Millimeter vom konischen Boden eines 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchens ab. Lege ein Stück Glaswolle in das geschnittene Rohr, um das mittlere Loch abzudecken. Legen Sie eine montierte Glaswolle-Filtereinheit in ein steriles 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen und beschriften Sie das Röhrchen.
Als Nächstes schneiden Sie eine 96-Well-PCR-Platte ohne Rand in sechs zweispaltige Stützracks. Drehen Sie die Zweisäulengestelle um, so dass die konischen Böden der Vertiefungen nach oben zeigen. Stellen Sie das Gestell in eine Petrischale aus Glas, die feuchtes Filterpapier enthält, und decken Sie es mit dem Deckel ab, um eine Feuchtigkeitskammer für die Blattscheiden zu schaffen.
Um Konidien aus dem sporulierenden Colletotrichum graminicola zu ernten, geben Sie drei bis vier Milliliter steriles deionisiertes Wasser in die Platte. Kratzen Sie mit einem sterilen Stößel mit konischer Spitze gleichmäßig über die gesamte Platte, um die Sporen aus dem Agar zu lösen. Geben Sie aseptisch einen Milliliter Sporensuspension auf eine Glaswollefiltereinheit und lassen Sie die Sporen durch Schwerkraft in das Sammelröhrchen fließen.
Zentrifugieren Sie die filtrierte Sporensuspension fünf Minuten lang bei 3.500 g und gießen Sie die Flüssigkeit in einen autoklavierbaren Behälter. Geben Sie einen Milliliter steriles deionisiertes Wasser in das Sammelröhrchen und rühren Sie vorsichtig, um die pelletierten Sporen zu resuspendieren. Zentrifugieren Sie die Suspension erneut und resuspendieren Sie die Sporen zur Quantifizierung in 300 bis 500 Mikroliter deionisiertem Wasser.
Verwenden Sie ein Hämozytometer unter einem zusammengesetzten Mikroskop mit 100-facher Vergrößerung, um die Sporenkonzentration zu bestimmen. Bereiten Sie dann 500.000 Sporen pro Milliliter Suspension mit deionisiertem Wasser vor. Um die Hülle vom ersten echten Blatt der Sämlinge der zweiten Woche zu entfernen.
Fahren Sie mit einem Daumennagel am überlappenden Rand der Hülle entlang und lösen Sie ihn vorsichtig von der Rutsche. Schneiden Sie die geborgene Blattscheide in drei bis fünf Zentimeter große Segmente. Rollen Sie jedes Segment vorsichtig ab, um die innere Epidermisschicht freizulegen.
Tragen Sie 20 Mikroliter Pilzsporensuspension auf die Innenfläche in der Mitte der Hülle oberhalb der Mittelrippe auf. Legen Sie die beimpften Blattscheiden waagerecht, mit einer Mittelrippe am Boden, in eine Petriplatte aus Glas, die angefeuchtetes Filterpapier enthält. Als nächstes werden die kleinen Feuchtekammern in eine durchsichtige, mit angefeuchtetem Keimpapier ausgelegte Aufbewahrungsbox gelegt, die Aufbewahrungsbox mit einem Deckel abgedeckt und bei 23 Grad Celsius unter Dauerbeleuchtung für den vorgesehenen Zeitverlauf inkubiert.
Überprüfen Sie die Kästchen regelmäßig auf Anzeichen von Krankheiten an den Hüllen.
