Zu Beginn werden die Objektträger mit den immunhistochemisch gefärbten Endometriumschnitten auf das Objektträgergestell eines pathologischen Panorama-Bildscanners gelegt. Platzieren Sie dann das Gestell im Objektträger-Scanfach des Geräts, um den Scanvorgang zu starten. Sobald der Scanvorgang abgeschlossen ist, starten Sie die Bildanalysesoftware und erstellen Sie einen neuen Ordner.
Importieren Sie die Bilder, die analysiert werden müssen. Um einen Gewebeklassifikator zu erstellen, markieren Sie mehrere Gewebe zusammen mit einer leeren Annotation, um einen Klassifikator einzurichten, der das Gewebe und die leeren Bereiche identifiziert. Verwenden Sie Echtzeit-Tuning, um die Erkennungskapazität der Software während der Markierungsanmerkung zu beobachten.
Um einen Analysealgorithmus zu erstellen, wählen Sie den Standard-Multiplex-IHC-Algorithmus in der Software aus und wählen Sie die negativen und positiven Pixel aus, um die Farbparameter der Zellerkennung einzustellen. Bestimmen Sie die Parameter des Zellkerns, des Zytoplasmas und der Zellmembran, bis die optimalen Parameter für das Bild gefunden sind. Legen Sie nun den positiven Schwellenwert für die Zellerkennung fest und optimieren Sie ihn, bis ein geeigneter Schwellenwert erreicht ist.
Wählen Sie als Nächstes den Gewebeklassifikator im Algorithmus aus. Überprüfen Sie den darin enthaltenen Gewebeteil, um Zellen anhand von Geweben zu identifizieren. Wählen Sie den Analysebereich aus und verwenden Sie dann den etablierten Algorithmus, um die Bilder zu analysieren.
Sobald die Analyse abgeschlossen ist, überprüfen Sie manuell die Genauigkeit der Gewebeerkennung, der Negativ- und der Positiverkennung. Wenn die Bilderkennung ungenau ist, passen Sie den Algorithmus und die Parameterschwellenwerte erneut an. Führen Sie die Bildanalyse aus, bis sie erfolgreich ist.
Exportieren Sie dann die Ergebnisse der Analyse. Stellen Sie die verschiedenen Analyseparameter entsprechend der Expression verschiedener Endometrium-Immunmarker ein. Berechnen Sie mit der Software den Anteil der Immunzellen des Endometriums.
Verwenden Sie die Werte nach der Berechnung, um die Konzentrationen verschiedener Immunzellen in der Gebärmutterschleimhaut von Patientinnen mit wiederholten Fehlgeburten zu beurteilen. Verschiedene Immunzellen wurden immunhistochemisch gefärbt, basierend auf ihrer individuellen Expression verschiedener Marker. Die braune Färbung steht für die positiven Immunzellen und die blaue für den Zellkern.
Bei Frauen mit wiederholten Fehlgeburten wurden unterschiedliche Immunzellen exprimiert. CD56-Zellen scheinen mit 16,76 % vorherrschend zu sein, wobei CD1a- und Foxp3-Zellen 0,11 bis 0,12 % der Immunzellpopulation ausmachen.
