Um die Perizyten zu markieren, geben Sie den Fluoreszenzfarbstoff TO-PRO-3 in die künstliche Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit oder ACSF. Nun wird das frisch geschnittene Rattenhirn im farbstoffhaltigen ACSF für 20 Minuten in einer dunklen Umgebung bei Raumtemperatur inkubiert. Als nächstes wird das Nylongewebesieb mit den Gehirnschnitten in eine Sechs-Well-Plattenspülkammer überführt.
Lassen Sie die Gehirnschnitte 10 Minuten in der Kammer ruhen. Um die nicht-vitalen Perizyten zu markieren, inkubieren Sie die mit TO-PRO-3 markierten Gehirnschnitte in konjugiertem Isolektin B4 bei 37 Grad Celsius für 30 Minuten im Dunkeln. Nach der Inkubation spülen Sie die Gehirnschnitte 15 Minuten lang in künstlicher Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit.
Als nächstes legen Sie die Gehirnschnitte in ACSF, das mit 5 % Kohlendioxid und 95 % Sauerstoff vergast ist. Dazu fügt man Propidiumiodid in einer Konzentration von 37 Mikromolar bei 37 Grad Celsius hinzu. Um die Farbstoffaufnahme zu stoppen und die Hintergrundmarkierung zu minimieren, spülen Sie die Präparate 15 Minuten lang in ACSF.
Unter normalen physiologischen Bedingungen kommt es bei Hirnperizyten nicht zum Zelltod. Es wurden lebensfähige Perizyten nachgewiesen, die nicht mit Propidiumiodid gefärbt waren. Bei den SAB-Modellen handelt es sich um vitale Perizyten innerhalb des Mikrogefäßsystems.
Es wurden auch nicht-vitale Perizyten nachgewiesen. Propidiumiodid-markierte nicht-vitale Perizyten blieben an der gesamten Mikrogefäße haften.
