Zu Beginn schneidest du die Haut der getöteten Maus vorsichtig ein, beginnend mit der Schädelöffnung und erstreckst dich in Richtung des vorderen Bereichs. Heben und entfernen Sie den Schädel vorsichtig mit einer Schere, ohne die Leptomeninge zu beschädigen, und sammeln Sie das gesamte Gehirn. Tauchen Sie das gesamte Gehirn in den Waschpuffer und spülen Sie ihn vorsichtig aus, um oberflächliches Blut zu entfernen.
Übertragen Sie das Gehirn in eine sterile Petrischale, ohne es zu zerkleinern. Ziehen Sie dann unter dem Mikroskop mit einer feinen Pinzette die Leptomeninge von der Gehirnoberfläche ab. Schneiden Sie das Leptomening-Gewebe mit einer sterilen Mikroschere in Fragmente.
Reparieren Sie die Verdauungsenzymmischung mit den angegebenen Komponenten. Geben Sie 10 Milliliter Mischung zu den Fragmenten und inkubieren Sie 15 Minuten lang bei 37 Grad Celsius. Rühren Sie vorsichtig, um die Fragmente vom Boden des Röhrchens zu lösen.
Fügen Sie dann 10 Milliliter Stopppuffer hinzu. Zentrifugieren Sie die Suspension bei 300 g fünf Minuten bei vier Grad Celsius. Entfernen Sie den Überstand vorsichtig mit einer Pipette.
Fügen Sie 10 Milliliter kaltes PBS hinzu und filtern Sie alle Klumpen durch ein 70-Mikron-Sieb in ein steriles 50-Milliliter-Röhrchen. Platte 10 bis die fünften Zellen pro Quadratzentimeter in einen mit Fibronektin beschichteten T25-Kolben mit fünf Millilitern Nährmedium geben und bei 37 Grad Celsius mit 5%igem Kohlendioxid für 24 Stunden inkubieren. Ersetzen Sie das Medium nach der Inkubation durch ein frisches Medium, um nicht anhaftende Zellen zu entfernen.
