Stellen Sie das Gut-on-a-Chip-Gerät zunächst 30 Minuten lang in einen trockenen Ofen, der auf 60 Grad Celsius eingestellt ist, um Feuchtigkeit zu entfernen. Setzen Sie das Gerät dann mit einem UV-Ozongenerator 60 Minuten lang einer UV- und Ozonbehandlung aus. Befestigen Sie den Einlass-, Bypass- und Auslassschlauch des oberen Mikrokanals mit Binderclips.
Legen Sie den Einlassschlauch für den unteren Mikrokanal ein und trennen Sie dann den Auslassschlauch für den unteren Mikrokanal. Stellen Sie sicher, dass der Bypassschlauch des unteren Mikrokanals offen bleibt. Geben Sie mit einer P100-Mikropipette 100 Mikroliter einer 1%igen Polyethyleniminlösung durch das Auslassloch des unteren Mikrokanals.
Schließen Sie den Auslassschlauch für den unteren Mikrokanal wieder an. Befestigen Sie den Einlass-Bypass und den Auslassschlauch des unteren Mikrokanals, gefolgt von den Einlassschläuchen für den oberen Mikrokanal mit Binder-Clips. Trennen Sie nun den Auslassschlauch für den oberen Mikrokanal und stellen Sie sicher, dass der Bypassschlauch offen bleibt.
Als nächstes werden 100 Mikroliter einer 1%igen Polyethyleniminlösung durch das Auslassloch des oberen Mikrokanals gegeben. Bringen Sie den Auslassschlauch des oberen Mikrokanals wieder an und lassen Sie das Gerät 10 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubieren. Wiederholen Sie den Vorgang mit 0,1 % Glutaraldehyd und dann mit deionisiertem Wasser, um überschüssige Oberflächenaktivierungslösung zu entfernen.
Den Chip über Nacht bei 60 Grad Celsius im Backofen trocknen. Am nächsten Tag den Chip aus dem Ofen nehmen und 10 Minuten in einer Biosicherheitswerkbank abkühlen lassen. Befestigen Sie den Einlass-, Bypass- und Auslassschlauch des oberen Mikrokanals, einschließlich des Einlassschlauchs des unteren Mikrokanals, mit Binderklammern.
Trennen Sie den Auslassschlauch für den unteren Mikrokanal. Geben Sie 20 Mikroliter extrazelluläre Matrix oder ECM-Mischung durch das Auslassloch des unteren Mikrokanals. Bringen Sie dann den Auslassschlauch für den unteren Mikrokanal wieder an.
Befestigen Sie den Einlass-, Bypass- und Auslassschlauch des unteren Mikrokanals, einschließlich des Einlassschlauchs des oberen Mikrokanals, mit Binderklammern. Nachdem Sie den Auslassschlauch für den oberen Mikrokanal getrennt haben, fügen Sie 20 Mikroliter VCM-Mischung durch das Auslassloch des oberen Mikrokanals hinzu. Bringen Sie den Auslassschlauch des oberen Mikrokanals wieder an und entfernen Sie dann die Binderklammer vom Auslassschlauch des unteren Kanals, wobei Sie sicherstellen müssen, dass beide Auslassrohre geöffnet sind.
Legen Sie den Chip eine Stunde lang in einen 37 Grad Celsius heißen Inkubator mit 5 % Kohlendioxid.
