Injizieren Sie zunächst ein präventives Analgetikum in eine anästhesierte Maus. Rasieren Sie mit einer Haarschneidemaschine den Kopf der Maus. Installieren Sie das Tier auf einem stereotaktischen Tisch und positionieren Sie die Ohrbügel richtig.
Befestigen Sie den Mund der Maus am Mausteil und positionieren Sie die Zunge vorsichtig nach außen, um ein Ersticken zu verhindern. Nach Überprüfung der Anästhesietiefe positionieren Sie die Elevationsstütze unter dem Tier, um sicherzustellen, dass Körper und Kopf horizontal waagerecht bleiben. Und verwenden Sie ein warmes Pad mit Papier, um die Temperatur des Tieres zu halten.
Tragen Sie Salbe auf beide Augen auf, um Trockenheit zu vermeiden. Desinfizieren Sie dann mit Jod und Alkohol den Kopf der Maus. Verwenden Sie ein Skalpell, um einen Schnitt entlang der Mittellinie des Kopfes zu machen, wobei sich der Schnitt hinter den Augen erstreckt, um die Lambda-Naht zu posten.
Legen Sie den Schädel frei und tupfen Sie ihn mit einem sterilen Wattestäbchen ab, das mit 0,9 Natriumchloridlösung getränkt ist. Identifizieren Sie unter einem Stereomikroskop die rostrale Rheinlandvene oder RRV und markieren Sie sie mit einem sterilen Bleistift. Bestätigen Sie mit einer sterilen Nadel als Referenz die Ausrichtung des Gehirns.
Stellen Sie sicher, dass sich die DV- und ML-Koordinaten nicht ändern. Als nächstes positionieren Sie eine sterile Glaspipette mit der Viruslösung an der RRV-Referenz für null anteroposteriore Referenz. Schieben Sie die Pipette entlang der sagittalen Naht vor, bis die gewählte anteroposteriore Koordinate erreicht ist.
Markieren Sie diese Stelle mit einem sterilen Bleistift und heben Sie die Nadel an. Bohren Sie vorsichtig einen kleinen Kreis um die markierte Position, um einen Bruch der oberen Sagittalsinus zu vermeiden, und entfernen Sie das Schädelstück mit einer kleinen Pinzette. Bewegen Sie dann die Pipette mit dem Median des oberen sagittalen Sinus als mediolaterale Referenz in die Position und senken Sie sie, bis sie die Dura mater als dorsoventrale Referenz berührt.
Machen Sie eine leichte Pause in der Dura mater und senken Sie die Pipette in die bevorzugte dorsoventrale Position. Injizieren Sie die angegebene Menge an Adeno-assoziierten Virus- oder AAV-Vektoren in das Gehirn und entfernen Sie die Pipette. Befreien Sie die Maus von den Ohrbügeln und schließen Sie die Haut mit chirurgischen Clips.
Bringen Sie das Tier in einen separaten, beheizten Käfig, um sich zu erholen. Behalten Sie die Erholung der Maus im Auge. Sobald es das Bewusstsein wiedererlangt hat, bringen Sie es in sein ursprüngliches Gehege zurück, wenn es vollständig genesen ist.
