Notieren Sie zunächst das Gewicht jeder Maus, positionieren Sie die eingeschläferte Maus dann in Rückenlage und sichern Sie ihre Gliedmaßen mit Klebeband. Verwenden Sie 70%igen Isopropylalkohol, um den Operationsbereich zu sterilisieren. Als nächstes machen Sie einen Mittellinienschnitt auf der Haut, beginnend vom Mittelbauch bis zur vorderen Halsregion.
Um an die Luftröhre zu gelangen, ziehen Sie die Fettpolster vorsichtig zurück, bewegen Sie die Bandmuskulatur seitlich und trennen Sie die Luftröhre vom umgebenden Bindegewebe. Schaffe mit einer Pinzette einen Raum zwischen der Luftröhre und der Speiseröhre. Heben Sie dann das Xiphoid an und schneiden Sie das Zwerchfell durch.
Führen Sie ein Hämostat ein, um das Brustbein anzuheben, um einen ungehinderten Weg vom Brustbein in die Halsregion zu gewährleisten. Klemmen Sie den Brustkorb auf beiden Seiten und schneiden Sie durch das Brustbein, das sich durch die Nackenmuskulatur erstreckt. Entfernen Sie nun den Thymus und jegliches Fett oder Muskel, das die Luftröhre blockiert, um die Trachealverzweigung freizulegen.
Durchtrennen Sie die Hauptbronchien und trennen Sie vorsichtig die Atemwege von der Speiseröhre. Schneiden Sie anschließend den Kehlkopf ab und entfernen Sie ihn. Besprühen Sie die präparierte Luftröhre mit einer sterilen Kochsalzlösung oder einer Konservierungslösung.
Verwenden Sie sterile Gaze, die in steriler Kochsalzlösung oder Konservierungslösung getränkt ist, und legen Sie sie auf Eis, um die Lebensfähigkeit zu erhalten. Nach einer leichten Betäubung der Maus und einer Induktionskammer wird intraperitoneal ein Cocktail aus Xylazin und Ketamin injiziert. Bringen Sie die Maus mit 2 bis 3 % Isofluran in die Induktionskammer zurück.
Rasieren Sie dann das Fell an der Operationsstelle. Vergewissern Sie sich, dass vor der orotrachealen Intubation keine Reflexreaktion auf ein Einklemmen des Zehs vorliegt. Intubieren Sie die Maus mit einem intravenösen Katheter mit 20 Gauge orotracheal und schließen Sie sie an ein Beatmungsgerät mit 50 % Sauerstoff und 2 % Isofluran an.
Aktivieren Sie nun ein Heizkissen und positionieren Sie die Maus in einer rechten seitlichen Position auf dem Pad, wobei der Kopf vom Chirurgen weg und der Schwanz zum Chirurgen zeigt. Befestigen Sie dann die Gliedmaßen mit Klebeband. Tragen Sie eine Veterinärsalbe auf die Augen auf, um Trockenheit während der Narkose zu verhindern.
Schrubben Sie den Operationsbereich zuerst mit 7,5 % Povidonjod, dann mit 70 % Isopropylalkohol und schließlich mit 10 % Povidonjod. Während dieser Zeit wird die Spenderluftröhre in einen intravenösen Katheter mit 16 Gauge geladen. Nachdem Sie einen Schnitt in die Haut des Empfängers gemacht haben, kauterisieren Sie den Muskel und das Bindegewebe.
Öffnen Sie mit zwei Retraktoren den fünften oder sechsten Zwischenrippenraum und halten Sie den Brustkorb offen. Verwenden Sie dann Wattestäbchen und eine Schere, um das untere Lungenband zu präparieren. Simulieren Sie die Erstellung des Weges für die Spenderluftröhre.
Um den Auslassschlauch des Beatmungsgeräts zu sichern, verschließen Sie ihn teilweise mit einem Drei-Wege-Absperrhahn, um das Aufblasen der linken Lunge zu erleichtern. Punktieren Sie den linken Lungenflügel mit einer 20-Gauge-Nadel, um einen Weg zu schaffen. Führen Sie dann den intravenösen Katheter mit 16 Gauge in die linke Lunge ein und extrudieren Sie die Spenderluftröhre hinein.
Nach dem Einsetzen des Tracheal-Allotransplantats wird der Drei-Wege-Absperrhahn freigegeben, um einen ungehinderten exspiratorischen Fluss durch den Ausflussschlauch zu ermöglichen. Um die Pleura-Injektionsstelle zu verschließen, positionieren Sie den Clip präzise auf der Einstichstelle, wobei der Rand an der Kontur des Lungenrandes ausgerichtet ist. Füllen Sie dann die Brusthöhle mit Kochsalzlösung und nehmen Sie die Kochsalzlösung mit Gaze auf.
Blasen Sie den linken Lungenflügel wieder auf und verschließen Sie die Rippen mit einer laufenden Naht. Schließen Sie den Muskel und die Haut mit unterbrochenen Nähten. Schalten Sie nun Isofluran aus und verabreichen Sie Meloxicam Analgetikum subkutan am Ende der Operation.
Beobachten Sie die Empfängermaus, bis sie wach ist. Entfernen Sie dann den Trachealtubus und setzen Sie die Empfängermaus in einen Käfig. Ein Tracheal-Allotransplantat wies eine vollständige Obstruktion mit fibroblastischem Gewebe auf, und die Epithelzellen waren sichtbar zerstört.
Umgekehrt blieb ein tracheales Isotransplantat patent, und die Epithelzellen blieben erhalten. Lymphoide Aggregate wurden in der Lunge mit dem transplantierten Tracheal-Allotransplantat beobachtet.
