Beschichten Sie zunächst eine Schmetterlingsnadel und ihren Schlauch mit 1%iger Kalium-EDTA-Lösung. Schneiden Sie den Schlauch direkt hinter der Nadel durch, um Blut tropfenweise aufzufangen. Legen Sie eine betäubte Ratte auf den stereotaktischen Rahmen, während Sie die Anästhesie durch eine Gesichtsmaske aufrechterhalten.
Lege ein Heizkissen unter das Tier und halte einen Teil seines Schwanzes in direktem Kontakt mit dem Pad. Bewegen Sie die Tiere so zurück, dass sie zur Seite zeigen und die seitliche Schwanzvene oben sichtbar ist. Tauche den Schwanz in warmes Wasser, um die Seitenvene zu erweitern.
Wischen Sie dann den Schwanz mit 70%igem Ethanol ab. Lege warmes Licht mit einer normalen Glühbirne auf den Schwanz. Führen Sie die 21G Butterfly-Nadel in einem Winkel von 20 Grad bis zu einer Tiefe von fünf Millimetern in die seitliche Schwanzvene ein.
Als nächstes wird Blut in einem 500-Mikroliter-Vakuum-Sammelröhrchen gesammelt, das fünf Milligramm Kalium-EDTA als Antikoagulans enthält. Entfernen Sie die Nadel und stoppen Sie den Blutfluss, indem Sie Druck auf die Einstichstelle ausüben. Setze die Ratte in ihren Heimatkäfig zurück.
Als nächstes drehen Sie das Röhrchen vorsichtig 10 Mal um, um das Antikoagulans im Blut zu mischen. Machen Sie 1,5 Zentimeter tiefe Löcher in das Eis und legen Sie die Schläuche senkrecht hinein. Innerhalb einer Stunde nach der Entnahme zentrifugieren Sie die Blutprobe in einer gekühlten Zentrifuge, um das Plasma zu trennen.
Saugen Sie dann etwa 200 Mikroliter Plasma an und vermeiden Sie dabei die rote und weiße Blutkörperchenschicht. Geben Sie das entnommene Plasma in ein steriles 0,2-Milliliter-Mikroröhrchen. Fünf Mikroliter der Probe zur Qualitätskontrolle beiseite legen und die verbleibende Probe bis zur Analyse bei minus 80 Grad Celsius lagern.
Das Blut wurde den Ratten zu fünf Zeitpunkten mit verschiedenen Methoden entnommen, wie z. B. der Vakuumtechnik an Tag 52, dem Schwanzmelken an Tag 55 und den Tropfentechniken an den Tagen 58 bis 64. Die Qualität der mittels UV-Spektrophotometrie ausgewerteten Plasmaproben zeigte, dass das Plasma mit einem mittleren Absorptionswert von 0,647 unter Verwendung der Vakuumtechnik rosa gefärbt war. In ähnlicher Weise führte die Schwanzmelktechnik zu rosafarbenem Plasma mit einer mittleren Absorption von 0,620.
Im Gegensatz dazu wurden mit dem gravitationsaktivierten Tropfenentnahmesystem klare Plasmaproben mit signifikant reduzierten mittleren Plasmaabsorptionswerten erhalten, was darauf hindeutet, dass dieses Verfahren optimal ist, um qualitativ hochwertige Proben für Analysen zu erhalten.
