Nehmen Sie zunächst eine Impfschleife, um eine monoklonale Kolonie von Candida albicans aus einer YPD-Platte zu entnehmen. Übertragen Sie die Kolonie in fünf Milliliter YPD-Flüssigmedium, ergänzt mit 50 Mikrogramm pro Milliliter Carbenicillin. Schütteln Sie die Zellen mit einer konstanten Geschwindigkeit von 220 U/min bei 30 Grad Celsius über Nacht.
Anschließend zentrifugieren Sie die Zellsuspension bei 400 g für fünf Minuten bei Raumtemperatur. Nachdem Sie den Überstand verworfen haben, resuspendieren Sie die Zellen in normaler Kochsalzlösung und passen Sie die Zellkonzentration an, indem Sie die Trübung der Zellsuspension an einen McFarland-Standard von 0,5 anpassen. Um 0,9 % normale Kochsalzlösung herzustellen, wiegen Sie 0,9 Gramm Natriumchlorid ab und lösen Sie es in 100 Millilitern deionisiertem Wasser auf.
Anschließend autoklavieren Sie die chirurgischen Instrumente vor der Anwendung 30 Minuten lang bei 121 Grad Celsius in einem Draht aus einer Titan-Nickel-Legierung. Dann werden 30 männliche C57BL/6-Mäuse nach dem Zufallsprinzip in eine Kontroll-Blindimplantat- und PJI-Gruppe aufgeteilt. Nachdem Sie die Mäuse betäubt haben, entfernen Sie die Haare von der linken Hintergliedmaße und verwenden Sie Jod, um den rasierten Bereich zu desinfizieren.
Überprüfen Sie die Tiefe der Anästhesie, indem Sie den Verlust des Aufrichtungsreflexes beobachten. Bei den Mäusen in der Kontrollgruppe darf keine Behandlung verabreicht werden. Verwenden Sie für die Mäuse in der Leerimplantat- und PJI-Gruppe eine Klinge Nummer 10, um einen fünf Millimeter langen Schnitt am Knie der linken Hintergliedmaße zu erstellen, um die Gelenke für weitere Eingriffe freizulegen.
Führen Sie nun eine sterile Spritzennadel ein, um ein fünf Millimeter langes Loch in den Oberschenkelmarkkanal zu bohren. Führe vorsichtig einen Draht aus einer Nickel-Titan-Legierung in das Loch ein, bevor du ihn mit einer Schere schneidest. Verabreichen Sie dann zwei Mikroliter YPD-Medium tropfenweise entlang des Drahtes aus Nickel-Titan-Legierung für die Mäuse in der Blindimplantatgruppe.
Mit einer Nylonnaht die Wunde Schicht für Schicht verschließen. Als nächstes inokulieren Sie zwei Mikroliter Candida albicans-Zellen in den Gelenkspalt von Mäusen entlang des Drahtes aus einer Nickel-Titan-Legierung in der PJI-Gruppe. Mit einer Nylonnaht die Wunde Schicht für Schicht verschließen.
Unterbringe die Mäuse 14 Tage lang mit freiem Zugang zu Wasser und Futter.
