Entfernen Sie zunächst die Transwell-Kulturplatte, die die 2D-Ilealenteroid-Monoschicht des Bovins enthält, aus dem Inkubator. Lassen Sie die Platte einige Minuten lang bei Raumtemperatur in der Biosicherheitswerkbank ausgleichen. Stellen Sie sicher, dass die STX2-Elektroden vorkonditioniert und das Volt-Ohm-Meter gemäß den Anweisungen des Herstellers auf 1000 Ohm kalibriert wurde.
Führen Sie das längere Ende der Sonde in das basolaterale Kompartiment und das kürzere Ende in das apikale Kompartiment der Transwell-Epithelzellkultur ein. Wenn der Aufbau stabilisiert ist, führen Sie drei transepitheliale elektrische Widerstandsmessungen pro Transwell-Einsatz durch, einschließlich des Einsatzes ohne Zellen. Berechnen Sie den Durchschnitt der Messungen für jeden einzelnen Einsatz.
Subtrahieren Sie die durchschnittliche Messung der Blindvertiefungen von der Versuchsvertiefung und multiplizieren Sie sie dann mit der Oberfläche des Einsatzes, um den Widerstand der Epithelbarriere zu bestimmen. Konfluente 2D-Monoschichten wurden in weniger als einer Woche Kultur beobachtet. TEER-Messungen zeigten einen stetigen Anstieg der Werte über sieben Tage, bevor sie am 12. Tag abfielen.
Die konfokale Mikroskopie der gefärbten 2D-Monoschicht zeigt die Lokalisierung der DAPI-Kernfärbung, der E-Cadherin- und der F-Aktin-Färbung. Die Zellen scheinen mit enteroendokrinen Zellen, Panethzellen und Enterozytenzelllinien differenziert zu sein. Die apikale Stimulation der Monoschicht führte zu einer erhöhten Zytokinproduktion.
