Nehmen Sie zunächst eine 16 Zentimeter lange, 12 Zentimeter breite und 20 Mikrometer dicke Polyethylen-Kunststofffolie. Verwenden Sie ein Glasschleifwerkzeug, um 30 halbkreisförmige Ausstülpungen in einem standardmäßigen 96-Well-PCR-Layout herauszupressen. Setzen Sie beide Seiten der gepressten Polyethylen-Kunststofffolie eine Stunde lang UV-Licht aus, um sie zu desinfizieren.
Geben Sie eine kleine Menge 10%Polyvinylalkohol auf die halbkreisförmige Oberfläche. Als nächstes legen Sie etwa 3.000 betäubte weibliche Trichogramma dendrolimi-Wespen in eine Sammelbox. Legen Sie die konvexe Seite der Folien-Eikarte in Richtung der Auffangbox und sichern Sie die Ränder mit einem Gummiband.
Geben Sie nun vier Mikroliter Aminosäurelösung in jede Ausstülpung. Decken Sie es dann mit einem weiteren Stück Polyethylen-Kunststofffolie ab. Verwenden Sie ein Gummiband, um die Auffangbox fest mit zwei Plastikfolien abzudecken.
Lassen Sie die Wespen vier bis acht Stunden lang frei parasitieren. Stellen Sie während der Parasitierung 10 % Saccharosewasser durch nasse Baumwolle zur Verfügung. Als nächstes wird die parasitierte Aminosäurelösung aus dem inneren Vorsprung der künstlichen Eikarte entnommen und auf die Kappe von 1,45-Milliliter-Röhrchen übertragen.
Decken Sie die Schlauchkappe mit einem 10 Mikrometer dicken Nylonnetz mit einem Durchmesser von 25 Millimetern ab. Befestigen Sie dann das Nylonnetz leicht im Schlauch. Zentrifugieren Sie das obere rechte Röhrchen 10 Sekunden lang bei 1,360 g.
Sammle die gefilterte Lösung, die das Gift enthält. Lagern Sie das Gift bei minus 80 Grad Celsius für weitere Analysen. Die BCA-Analyse der Giftproben zeigte, dass die Konzentration des Giftproteins zwischen 0,35 und 0,46 Mikrogramm pro Mikroliter lag.
Die Negativkontrolle der Aminosäurelösung wies nur eine Proteinkonzentration von 0,03 bis 0,05 Mikrogramm pro Mikroliter auf. Die SDS-PAGE-Analyse des Giftes ergab eine Proteinbreite, die von unter 10 Kilodalton bis über 130 Kilodalton reichte.
