FACS Enrichment of Zebrafish Gut Cell Suspension for scRNAseq

Um eine fluoreszenzaktivierte Zellsortierung (FACS) an den aus Zebrafischlarven isolierten Darmzellen durchzuführen, verwenden Sie die Wildtyp-Larvenprobe, um die Tore der sortierten Zellpopulation zu setzen, indem Sie 3.000 Zellen auf dem Durchflusszytometer aufzeichnen. Verwenden Sie eine 100-Mikron-Düse und stellen Sie die Sortiergenauigkeit auf 4-Wege-Reinheit ein. Geben Sie das Sammelröhrchen mit 200 Mikrolitern PBS mit 5 % fötalem Kälberserum in das Faxgerät.

Die aus den isolierten Eingeweiden hergestellte Zellsuspension wird geladen und nach dem Ausschluss von Dubletten in toten Zellen in das Sammelröhrchen einsortiert. Halten Sie das Sammelröhrchen nach der Zellsortierung auf Eis und führen Sie eine Viabilitätsprüfung mit Trypanblau durch. Zählen Sie die Anzahl der Zellen in der Suspension mit einem Hämozytometer.

Die Zellen sind nun bereit, für die Einzelzell-RNA-Sequenzierung aufbereitet zu werden. Verwenden Sie ca. 20.000 Zellen pro Probe.