Intranodale Injektion von B16F10-GP-Zellen in den Leistenlymphknoten von Mäusen

Beginnen Sie mit der Aspiration von 20 Mikrolitern B16F10-GP-Melanomzellsuspension mit einer 100-U-Insulinspritze. Entfernen Sie Blasen aus der Spritze. Als nächstes injizieren Sie bei einer Maus, die sich einer Tumorresektion unterzogen hat, die Zellsuspension in einen Leistenlymphknoten.

Führen Sie die Nadel am distalen Ende des Lymphknotens ein und bewegen Sie sie langsam in die Mitte des Lymphknotens. Beobachten Sie eine signifikante Schwellung des Lymphknotens, die zeigt, dass die Flüssigkeit genau injiziert wird. Injizieren Sie ein gleiches Volumen PBS in den Leistenlymphknoten auf der anderen Seite.

Nähen Sie den Schnitt mit einer 3-0-Naht. Desinfizieren Sie die Wundhaut mit Povidon-Jod, setzen Sie die Maus dann in einen sauberen Käfig und halten Sie die Wärme mit Infrarotlicht aufrecht. Halten Sie die Maus in der lateralen Dekubitusposition und überwachen Sie sie kontinuierlich, bis das Bewusstsein wiedererlangt ist.

Nach Implantation mit B16F10-GP-Zellen wurde eine Lymphknotenmetastasierung durch Hämatoxylin- und Eosinfärbung beobachtet. Im Frühstadium zeigte der metastasierte Lymphknoten eine teilweise Besetzung durch Tumorzellen, wobei einige Bereiche noch nicht betroffene Lymphozyten enthielten. Im Spätstadium war der metastasierende Lymphknoten mit Tumorzellen gefüllt, begleitet von einer Tumorangiogenese.

Darüber hinaus betrug die Häufigkeit antigenspezifischer CD8-positiver T-Zellen im peripheren Blut im Frühstadium 2,81 %, die im Spätstadium auf 1,48 % sank. Interessanterweise blieb der Prozentsatz der CD8-positiven T-Zellen in den nicht-metastasierten Lymphknoten stabil, war aber im metastasierten Lymphknoten im Frühstadium vorübergehend erhöht, nahm aber im Spätstadium stark ab.