Wiegen Sie zunächst drei Gramm Rhodiola crenulata-Pulver und füllen Sie es in eine konische 100-Milliliter-Flasche um. Geben Sie mit einer großen Schüsselpipette 25 Milliliter Methanol in die Flasche. Legen Sie die Flasche in das Ultraschallgerät.
Stellen Sie die Leistung auf 250 Watt, die Frequenz auf 40 Kilohertz, die Zeit auf 30 Minuten ein und starten Sie die Ultraschalluntersuchung. Spülen Sie anschließend die Außenseite der Flasche unter fließendem Wasser aus, bis sie Raumtemperatur erreicht hat. Filtern Sie die Lösung durch eine 0,22-Mikron-Mikroporusmembran.
Mit einer Ein-Milliliter-Spritze 800 Mikroliter Flüssigkeit aus der Flasche absaugen und 400 Mikroliter der Midstream-Lösung in eine chromatographische Probenflasche sammeln. Messen und geben Sie ein Milligramm Salidrosid, 0,5 Milligramm Tyrosol und 0,5 Milligramm Gallussäure in drei separate Ein-Milliliter-Messkolben. Füllen Sie dann jeden Kolben bis zu der mit Methanol markierten Skala.
Beschallen Sie die Proben im Ultraschallgerät unter den zuvor beschriebenen Bedingungen. Nach Ultraschall werden 800 Mikroliter Flüssigkeit aus dem Kolben abgesaugt. Filtern Sie die Lösung durch eine 0,22 Mikrometer große mikroporöse Membran und sammeln Sie 400 Mikroliter Filtrat in der Flasche.
Geben Sie Trichlormethan, Ethylacetat, Methanol und Ameisensäure auf eine Seite des Doppeltank-Chromatographiezylinders. Schütteln Sie den Zylinder, um den Inhalt gleichmäßig zu vermischen, und decken Sie den oberen Zylinderkopf ab. Ordnen Sie die Gallussäure, das Salidrosid, die Tyrosol-Standardlösungen und unsere Crenulata-Lösung auf dem Probengestell in den Positionen A1 bis A4 an. Legen Sie eine 5x10 Zentimeter große Silikonfolie auf den Probenahmetisch.
Schalten Sie die automatische Probenahmemaschine ein und öffnen Sie das Luftregelventil. Drücken Sie die Taste Weiter, um die automatische Probenahme zu starten. Schalten Sie nach der Probenahme die Maschine und das Luftventil aus.
Entfernen Sie die Silikonfolie aus der Maschine. Legen Sie die Silikonfolie auf die andere Seite des Doppeltank-Chromatographiezylinders. Decken Sie den oberen Zylinderkopf ab und tränken Sie ihn 20 Minuten lang.
Halten Sie anschließend mit einer Pinzette das obere Ende der dünnen Schichtplatte fest und legen Sie die Silikonfolie schnell in das Entwicklungsmittel. Sobald das organische Lösungsmittel verdunstet ist, besprühen Sie die Silikonfolie mit chromogener Lösung. Die chromatographische Dünnschichtanalyse zeigte, dass die R. crenulata-Probe in Flecken der gleichen Farbe auftrat, die den Gallussäure-, Salidrosid- und Tyrosolstandards entsprachen.
