Bereiten Sie zunächst die Maus für die Operation vor und positionieren Sie sie auf dem stereotaktischen Rahmen. Heben Sie dann die Haut am Schädel an und halten Sie die Schere zwischen das rechte Auge und das Ohr, um einen Schnitt zu machen. Schneiden Sie zur linken Seite des Schädels, folgen Sie den Schnittspuren und entfernen Sie den entstandenen runden Hautlappen.
Kratzen Sie mit einer Skalpellklinge oder einer Mikrokürette vorsichtig die Schädeloberfläche, um das Periost zu entfernen. Verwenden Sie Kochsalzlösung und einen Staubsauger, um den Operationsbereich frei von Schmutz zu halten. Kratzen Sie das Periost, um eine bessere Haftung auf dem Cyanacrylatkleber und einem Zahnzement zu gewährleisten.
Markieren Sie dann mit einem autoklavierten Bleistift die Position des Schädelfensters. Halten Sie den Bohrer in der dominanten Hand und eine Spritze oder Pinzette in der nicht dominanten Hand. Tragen Sie kalte Kochsalzlösung auf das Schädeldach auf, um eine Überhitzung zu vermeiden und die chirurgische Sicht sauber zu halten.
Positionieren Sie während des Bohrens den Glasabdeckschirm auf dem Schädel, um sicherzustellen, dass er genau in das Schädelfenster passt. Sobald es möglich ist, den Schädellappen zu drücken, verwenden Sie eine Pinzette, um das Fragment vorsichtig aus dem Operationsfeld zu entfernen. Wenn leichte Blutungen auftreten, verwenden Sie einen hämostatischen Schwamm für die topische Anwendung von eiskalter Kochsalzlösung mit leichtem Druck, um den Blutverlust zu reduzieren.
Nehmen Sie die kultivierten C6-Gliomzellen zur Implantation. Aspirieren Sie einen Mikroliter Zellsuspension in einer gasdichten Mikroliterspritze. Positionieren Sie dann die Spritze innerhalb des stereotaktischen Rahmens.
Um Zellen für die Zwei-Photonen-Bildgebung zu implantieren, injizieren Sie 0,5 Mikroliter der Zellsuspension 0,8 Millimeter tief in den oberflächlichen Hirnbereich. Ziehen Sie nach der Injektion die Nadel zurück und verlassen Sie das Hirngewebe. Bewegen Sie nun den Kopfbügel und den Glasdeckschirm von Alkohol in eine Kochsalzlösung und verwenden Sie eine Vakuumspitze oder Pinzette, um diese Komponenten zur Operationsstelle zu navigieren.
Positionieren Sie den Glasdecker im Schädelfenster und tragen Sie eine kleine Menge Cyanacrylatkleber auf. Entfernen Sie verschütteten Kleber auf dem Glasdeckglas mit einem Wattestäbchenapplikator oder kratzen Sie ihn vorsichtig mit einem Skalpell ab. Befestigen Sie den Glasabdeckschirm im Schädelfenster und setzen Sie die Kopfstange auf.
Mischen Sie Zahnzement, positionieren Sie die Kopfstange und tragen Sie Zement auf die Umgebung auf. Reinigen Sie überflüssigen Zement mit einer Spritzenspitze, einem Skalpell oder einer Bohrspitze. Überprüfen Sie nach dem Versiegeln des Schädelfensters auf freiliegende Schädelbereiche.
