Schalten Sie zunächst den Glasnadelabzieher ein und stellen Sie dann die Hitze auf 280, die Geschwindigkeit auf 170, die Verzögerung auf 250 und die Stange auf 30 ein. Schrägen Sie die Spitze der Kapillarglasnadel ab. Laden Sie dann mit einer Mikroinjektionspumpe etwa zwei Mikroliter doppelsträngige RNA-Lösung mit Ferritin-Schwerkettenhomologie in die Injektionsnadel.
Die Agarplatte mit Trichogramma dendrolimi Puppen wird auf den zusammengesetzten Mikroskoptisch übertragen. Führen Sie die Injektionsnadel vorsichtig in einem Winkel von etwa 30 Grad in den Bauch einer Puppe ein und injizieren Sie nach und nach fünf Nanoliter doppelsträngige RNA-Lösung mit Ferritin-Schwerkettenhomologie. Inkubieren Sie etwa 700 Puppen pro Behandlung bei 25 Grad Celsius für 24 oder 48 Stunden.
Extrahieren Sie den RNA-Gehalt aus 100 Puppen pro Replikat. Beobachten Sie ab etwa 50 Puppen pro Behandlung das Schlüpfen der Wespen. Notieren Sie schließlich die Emergenzrate und die Deformitätsrate der Wespen.
T.dendrolimi-Puppen, die mit doppelsträngiger Ferritin-Schwerkettenhomologie injiziert wurden, zeigten eine signifikant niedrigere Emergenzrate im Vergleich zu denen, die mit doppelsträngigem GFP oder ohne Injektion injiziert wurden. Bei geschlüpften Wespen entwickelten 51,85 % der T. dendrolimi Wespen, die einer doppelsträngigen Ferritin-Schwerkettenhomologie unterzogen wurden, deformierte kleine Flügel. Diese Verformung fehlte bei Wespen, denen doppelsträngiges GFP injiziert wurde, oder bei Wespen ohne Injektion.
Darüber hinaus zeigten T. dendrolimi Puppen, denen eine doppelsträngige Ferritin-Schwerketten-Homologie injiziert wurde, Melanismus, was auf einen abnormalen Eisenstoffwechsel hinweist. Das Melanin wurde bei Wespen, denen doppelsträngiges GFP injiziert wurde, oder bei Wespen ohne Injektion nicht beobachtet.
