Übertragen Sie ein mit Mäusegehirn angereichertes Immunpellet aus einem 15-Milliliter-Röhrchen auf eine 96-Well-Platte mit rundem Boden. Nachdem Sie die Platte fünf Minuten lang bei 500 g zentrifugiert haben, entfernen Sie den Überstand durch Schnippen. Resuspendieren Sie die Zellen in 100 Mikroliter FACS-Puffer und übertragen Sie dann 10 Mikroliter aus jeder Vertiefung in die Kontrollvertiefungen.
Fünf Minuten bei 500 g zentrifugieren. Nachdem Sie den Überstand aus den zentrifugierten Zellen entfernt haben, fügen Sie 50 Mikroliter FC-Block mit doppelter Konzentration hinzu. 10 Minuten auf Eis inkubieren.
Geben Sie nun 50 Mikroliter des Antikörper-Mastermixes mit der doppelten gewünschten Endkonzentration hinzu und inkubieren Sie ihn im Dunkeln auf Eis. Dann werden 200 Mikroliter des FACS-Puffers in jede Vertiefung gegeben und fünf Minuten lang bei 500 g zentrifugiert. Verwerfen Sie den Überstand durch Schnippen und waschen Sie die Zellen dann in 300 Mikrolitern FACS-Puffer.
Zentrifugieren und resuspendieren Sie die Zellen in 200 Mikrolitern FACS-Puffer. Zum Schluss wird die Suspension in ein Durchflussrohr mit 300 Mikrolitern FACS-Puffer überführt.
