Um das Massenspektrometer oder die MS-Kalibrierung für LC-TIMS-TOF-MS/MS zu starten, öffnen Sie die TIMS-Steuerungssoftware und klicken Sie auf der Unterregisterkarte Kalibrierung auf m/z, wählen Sie Tuning-Mix aus der Dropbox und klicken Sie auf Kalibrieren in der unteren rechten Ecke. Klicken Sie weiter auf Kalibrieren, bis eine Punktzahl von 100 % erreicht ist. Wählen Sie nun die Registerkarte Mobilität aus, und führen Sie die gleichen Schritte wie gezeigt aus, bis die Kalibrierungsbewertung von 100 % erreicht ist.
Um jeden Kalibrierpunkt in der Kalibrierkurve zu generieren, spießen Sie die interne Lipidstandardmischung mit 10 Mikrolitern deuterierter interner Standardmischung auf. Bereiten Sie sieben solcher dotierten Proben für sieben Kalibrierpunkte im gewünschten Bereich vor. Mit der Datenanalysesoftware können Sie die Fettsäureketten basierend auf den passiven MS/MS-Mustern manuell annotieren.
Um die Markierung stabiler Isotope oder die SIL-Effizienz zu bestimmen, berechnen Sie das Verhältnis der Fläche der SIL-haltigen Isotope zur Fläche der nicht SIL-haltigen Isotope. Berechnen Sie das theoretische Muster, indem Sie die Wahrscheinlichkeit bestimmen, ein markiertes Atom an einer beliebigen Stelle zu finden. Berechnen Sie die SIL-Anreicherung, indem Sie die experimentellen Isotopenprofile an das theoretische Muster anpassen, das auf einer Datenanalysesoftware simuliert wurde.
Um den Lauf zu starten, aktivieren Sie den Säulenofen, indem Sie auf die Schaltfläche Thermometer klicken, und aktivieren Sie die Pumpen, indem Sie auf die Ventiltaste klicken. Legen Sie die MS-Methode auf die entsprechende Methode fest, die zuvor gespeichert wurde. Stellen Sie sicher, dass das Injektionsvolumen fünf Mikroliter beträgt, und richten Sie das Fläschchen eines Ziels 20 zu eins aus, und speichern Sie die Probenliste.
Starten Sie die Sequenz und bestätigen Sie die erfolgreiche Injektion durch die Meldung injected, die auf dem System angezeigt wird. Kopieren Sie die erste Zeile und fügen Sie sie unten ein, um eine neue zweite Zeile zu generieren. Befüllen Sie Zeile zwei je nach Experiment mit Proben.
Stellen Sie sicher, dass die richtige Position im Autosampler verwendet wird. Wenn die mobilen Phasen frisch sind, führen Sie zunächst einen Peak-Shape-Test mit den Lipidmischungsstandards des Herstellers durch, um ihn mit früheren Ergebnissen zu vergleichen. Die Lipidmischung und die Standards werden auf dem Bildschirm angezeigt.
Stellen Sie sicher, dass neue Linien über die richtige Trennmethode verfügen und nicht über die Vorkonditionierungsmethode, die in Zeile eins verwendet wird. Stellen Sie sicher, dass die eingegebene MS-Methode korrekt ist. Überprüfen Sie, ob die richtige Verarbeitungsmethode geladen und der automatisierte Prozess ausführen aktiviert ist.
Speichern Sie die Probenliste, um sicherzustellen, dass die Proben nach Abschluss des aktuellen Laufs analysiert werden.
