Bildanalyse von Hellfeld- und Fluoreszenzbildern der Mäusehirnschnitte für die epon post-embedding korrelative Licht- und Elektronenmikroskopie

Nehmen Sie zunächst die Hellfeld- und Fluoreszenzbilder von Mäusehirngewebe auf, das mScarlet exprimiert. Suchen Sie die Rohdaten, um eine Navigationskarte mit mehreren Hellfeldbildern mit unterschiedlichen Sichtfeldern in ImageJ zu erstellen. Öffnen Sie dann ImageJ, navigieren Sie durch Plugins, klicken Sie auf Stitching und wählen Sie Raster- oder Sammlungs-Stitching.

Klicken Sie auf Grid-Schlange spaltenweise eingeben, wählen Sie Reihenfolge nach oben und links und klicken Sie auf Slice-Größe festlegen. Navigieren Sie zur Auswahl des Datenpfads und klicken Sie auf Dateinamen festlegen, gefolgt von der Überprüfung der Anzeigefusion. Um sequenzielle Hellfeldbilder einer bestimmten Zelle zu importieren, klicken Sie auf Datei und wählen Sie Importieren, gefolgt von der Bildsequenz.

Um die Summenintensitätsprojektion dieser Bilder anzuzeigen, wechseln Sie zu Bild, wählen Sie Stapel aus, klicken Sie auf Z-Projektion, und klicken Sie dann auf Summensegmente. Wählen Sie dann Bearbeiten und klicken Sie auf Umkehren, um das Summenintensitätsprojektionsbild umzukehren und die Sichtbarkeit von Goldnanopartikeln zu verbessern. Importieren Sie als Nächstes sequenzielle Fluoreszenzbilder.

Um ein Summenintensitätsprojektionsbild zu erstellen, klicken Sie auf Bild und wählen Sie Stapel aus. Gehen Sie dann zur Z-Projektion, klicken Sie auf Summensegmente und speichern Sie die Bilder im TIF-Format. Öffnen Sie die Summenintensitätsprojektionsbilder von Hellfeld- und Fluoreszenzbildern.

Gehen Sie zum Bild, wählen Sie die Farbe aus und klicken Sie auf Kanäle zusammenführen, um die Summenintensitätsprojektion des Hellfeldbildes mit dem Fluoreszenzbild zusammenzuführen. Wählen Sie anschließend das Bild aus und klicken Sie auf den Typ, gefolgt von der RGB-Farbe, um das Format des zusammengesetzten Bildes in RGB umzuwandeln. Die Goldnanopartikel erscheinen grün und das fluoreszierende Protein rot.

Speichern Sie dann das Bild als TIF-Datei.