Registrierung des fluoreszenzmikroskopischen Bildes mit dem elektronenmikroskopischen Bild für korrelative Licht- und Elektronenmikroskopie

Öffnen Sie zunächst die Registrierungssoftware und suchen Sie nach EasyCLIMv0. Klicken Sie nach der Suche auf EasyCLIMv0, klicken Sie auf Bild oder Sequenz und wählen Sie Öffnen aus, um das Elektronenmikroskopiebild und die zusammengesetzten Bilder von Hellfeld- und Fluoreszenzbildern zu importieren. Klicken Sie in der EasyCLIMv0-Oberfläche auf 2D XYT, um das nicht starre 2D oder 3D als Ausrichtungsmodus auszuwählen.

Klicken Sie im EasyCLIMv0-Fenster auf das Dropdown-Feld rechts neben dem ausgewählten Bild, das transformiert und in der Größe geändert werden soll, wahrscheinlich FM, um die zusammengesetzte RGB-Farbe tiff auszuwählen, und klicken Sie dann auf das Dropdown-Feld rechts neben dem ausgewählten Bild, das nicht geändert wird, wahrscheinlich EM, um sechs Bilder tiff auszuwählen. Klicken Sie auf Start, um den Registrierungsprozess zu starten. Klicken Sie im elektronenmikroskopischen Bildfenster sechs Bilder tiff auf ein Goldnanopartikel, um 0,1 darauf zu platzieren.

Im Fluoreszenzmikroskopie-Bildfenster zusammengesetztes RGB-Farbtiff. Klicken Sie auf das entsprechende Goldnanopartikel, um 0,1 darauf zu setzen. Klicken Sie dann auf Transformation aktualisieren, um die Ausrichtung der Fluoreszenz- und Elektronenmikroskopiesignale von Goldnanopartikeln zu bestätigen, und schließen Sie die Registrierung mit einem Klick auf Stopp ab.

Um den ausgerichteten Bildstapel mit vier Kanalbildern zu exportieren, klicken Sie auf das überlagerte Bild, wählen Sie Bild oder Sequenz und klicken Sie auf Speichern unter.Öffnen Sie nun ImageJ, klicken Sie auf Datei und wählen Sie Öffnen, um das Overlay-Bild zu importieren. Gehen Sie zu Bild, klicken Sie auf Stapel und stapeln Sie dann zwei Bilder, um sie in Bilder mit vier Kanälen zu unterteilen. Wählen Sie anschließend Bild aus und klicken Sie auf Farbe, gefolgt von Kanäle zusammenführen, um die drei Kanäle zu einem zusammengesetzten Bild zusammenzuführen.

Um das zusammengesetzte Bild in ein korrelatives Licht- und Elektronenmikroskopiebild umzuwandeln, wählen Sie "Bild" und dann "Typ" aus, und klicken Sie auf "RGB-Farbe".