Organoidtransplantation des menschlichen Gehirns in der embryonalen Chorioallantoismembran des Kükens für die neurovaskuläre Modellierung

Um zu beginnen, Gehirnorganoide aus embryonalen H9-Stammzellen zu gewinnen und neu befruchtete Hühnereier zu erhalten. Am ersten Tag die Eierschalenoberfläche mit 70% Ethanol reinigen und trocknen lassen. Legen Sie einen chirurgischen Papierklebeverband auf das Ei.

Reinigen Sie mit einer Lampe die dünnste Eierschalenoberfläche an der oberen Spitze. Stechen Sie dann mit einer sterilen Nadel vorsichtig in die Eierschale, um ein Luftkammerloch zu schaffen, ohne die Kükenkamera zu stören. Um den Embryo vor der äußeren Umgebung zu schützen, decken Sie das Luftkammerloch mit einem neuen Verband ab und brüten Sie das Ei bei 38 Grad Celsius aus.

Entfernen Sie am siebten Tag den Verband und wischen Sie die Oberfläche der Eierschale mit 70% Ethanol ab. Legen Sie dann einen neuen, größeren Verband an, der die Verlängerung abdeckt. Stechen Sie vorsichtig in die Eierschale, um das Loch in ein Veredelungsfenster mit einem Durchmesser von zwei Zentimetern zu vergrößern.

Entfernen Sie mit einer Pinzette die Ränder des Eierschalenfensters und ziehen Sie den Verband ab, um den restlichen Staub und die Eierschalenstücke zu entfernen. Sammeln Sie das Organoid mit einer sterilen Breitbandspitze in 50 Mikrolitern PBS und übertragen Sie es vorsichtig auf die Nocke, die der Position des Embryos gegenüberliegt. Fügen Sie einen sieben Mikroliter Tropfen Streichholzgel um das Organoid hinzu.

Verschließen Sie das Fenster mit Parafilm und befestigen Sie es mit einem Klebeverband an der Schale. Inkubieren Sie das Transplantat für die Nockendifferenzierung. Entfernen Sie nach fünf Tagen den Klebeverband.

Vergrößern Sie das Fenster mit einer Schere und einer feinen Pinzette, um die Probenentnahme zu erleichtern. Fixieren Sie es zwei Minuten lang mit 4% Paraformaldehyd und sammeln Sie einen 1,5 Quadratzentimeter großen Abschnitt des Nockens, der das Organoid enthält. Um eine erfolgreiche Transplantation zu bestätigen, führen Sie eine Hämatoxilin- und Eosinfärbung von 20 Mikrometer dicken Gewebescheiben von Cam mit Organoid durch.

Hämatoxilin- und Eosin-Färbungen des Transplantatgewebes zeigten, dass die Organoide neben den Nockengefäßen ohne Anzeichen einer Infiltration von Blutgefäßen weiter reiften.