1 Zu Beginn entnehmen Sie den Patienten das Tumorgewebe2 und bearbeiten es mit einem Zerkleinerer. 3 Kippen Sie die Petrischale mit dem gehackten Tumor 4 auf 45 Grad nach oben und entnehmen Sie vorsichtig 2,5 Milliliter 5 des H-GPSA-Mediums. 6 Um die Tumorstücke zu waschen, fügen Sie zwei Milliliter 7 Erythrozyten-Lysepuffer hinzu und inkubieren Sie in einem Orbitalschüttler 8 mit langsamer Geschwindigkeit.
9 Entsorgen Sie dann den Lysepuffer vollständig. 10 Als nächstes fügen Sie den Gewebestücken 12 vier Milliliter des vom Patienten stammenden 11 Organoidmediums hinzu und übertragen Sie die Gewebestücke auf eine Sechs-Well-Platte mit extrem niedrigem Aufsatz 13. 14 Inkubieren Sie die Platte in einem Orbitalschüttler 15 für zwei bis vier Wochen.
16 Wechseln Sie alle zwei Tage die Hälfte des verbrauchten Mediums 17 durch ein vorgewärmtes, frisches, vom Patienten gewonnenes Organoidmedium. 18 Um Gewebehypoxie zu verhindern, 19 werden die vom Patienten stammenden Organoide 20 in eine sterile Glas-Petrischale 21 übertragen und die Gewebemorphologie unter einem Mikroskop beobachtet. 22 Schneide dann mit einem Skalpell das Klebegewebe ab.
23 von Patienten stammende Organoide, die mit der Chopper-Methode gewonnen wurden, 24 erreichten innerhalb einer Woche 25 die gewünschte abgerundete Form 25 im Vergleich zu den manuell gehackten. 26 Und die Anzahl der gebildeten Organoide 27 war mit dieser Methode signifikant höher.
