Analysieren Sie die Daten mithilfe von Histogrammen auf dem YL2H- oder RL2H-Kanal. Verwenden Sie in diesem Fall ein YL2H-Histogramm, da die Proben mit Propidiumiodid gefärbt wurden. Richten Sie als Nächstes ein Winkelgatter ein, um lebende und tote Zellen zu trennen, und kennzeichnen Sie das linke Tor als aktiv und das rechte Tor als tot.
Wenden Sie dieses Gate auf alle Samples an und passen Sie es an. Stellen Sie sicher, dass das Gate ordnungsgemäß gezeichnet ist, indem Sie das Gate für mehrere Samples im Datensatz anzeigen. Doppelklicken Sie auf dem ungefärbten Wildtyp-Steuerelement auf das Live-Gate.
Legen Sie die X-Achse des Punktdiagramms auf den Vorwärts-Streubereich und die Y-Achse auf den seitlichen Streubereich fest. Verwenden Sie dann das Werkzeug Polygon-Gate, um die Zellpopulation zu umreißen und sie als Zellen zu beschriften. Schließen Sie Trümmer oder sterbende Zellen und Aggregate aus, indem Sie auf ihre typischen Positionen im Punktdiagramm achten.
Wenden Sie das Zellentor unter dem Live-Gate für alle Proben an und stellen Sie sicher, dass es die wahrscheinliche Zellpopulation für alle Proben abdeckt. Doppelklicken Sie auf das Zellengatter des nicht gefärbten Wildtyp-Steuerelements, um die Ereignisse in diesem Gatter anzuzeigen. Um das Punktdiagramm anzupassen, stellen Sie die X-Achse auf den Vorwärtsstreuungsbereich und die Y-Achse auf die Vorwärtspunkthöhe ein.
Identifizieren Sie die diagonale Verteilung einzelner Zellen in diesem Punktdiagramm und unterscheiden Sie sie von Dubletten. Verwenden Sie das Werkzeug Polygon-Gate, um die Singulett-Ereignisse einzukreisen, und nennen Sie diese Gate-Singuletts. Wenden Sie das Unterzahltor für alle Proben unter dem Zellentor an, stellen Sie sicher, dass es Dubletten ausschließt, während Singuletts enthalten sind, und passen Sie das Tor bei Bedarf für verschiedene Proben an.
Doppelklicken Sie in der ungefärbten Wildtyp-Kontrollprobe auf das Singlelet-Gate. Ändern Sie die X-Achse des Punktdiagramms in BL1H und die Y-Achse in VL2H. Zeichnen Sie mit dem Werkzeug Polygon-Gate ein diagonales Gate, um Fluor-2-Fluoreszenzzellen in VL2 und BL1 zu erfassen.
Kennzeichnen Sie dieses Gatter als pHL-positiv. Wenden Sie den positiven pHL-Gatter für alle Proben unter dem Unterzahlanschnitt an. Stellen Sie das pHL-Gate so ein, dass Zellen mit höherer Fluoreszenzintensität als die autofluoreszierenden Zellen in der Wildtyp-Kontrolle abgedeckt werden.
Um die Statistiken zu exportieren, klicken Sie auf den Tabelleneditor, dann auf die Bearbeitungsleiste und wählen Sie schließlich Spalte hinzufügen. Integrieren Sie Säulen für die Gesamtzahl der nicht behandelten Tiere, die positive Anzahl der pHLs, die Live-Frequenz der Gesamtzahl, die positive pHl-Häufigkeit des Elternteils, den pHL-positiven Median VL2H und den pHL-positiven Median BL1H. Um die Exporteinstellungen im Tabelleneditor anzupassen, stellen Sie display auf Datei und Text auf CSV ein.
Wählen Sie das Dateiziel und den Namen aus und klicken Sie dann auf Tabelle erstellen. Im Laufe der Zeit wurde eine allmähliche leichte Versauerung als Reaktion auf den Hunger beobachtet, der sich um 90 Minuten stabilisierte. Nach der Wiedereinführung von Glukose, wie durch die grüne Linie angezeigt, kehrte der glykosomale pH-Wert innerhalb von 30 Minuten auf das Niveau vor dem Hungern zurück, was darauf hindeutet, dass der glykosomale pH-Wert als Reaktion auf Glukose dynamisch und regulierbar ist.
