Sammeln Sie zunächst Kotpellets von T4-Phagen-inokulierten Escherichia coli-monokolonisierten Mäusen in ein steriles, vorgewogenes Mikrozentrifugenröhrchen. Notieren Sie das Endgewicht des Röhrchens und berechnen Sie das Probengewicht, indem Sie das ursprüngliche Röhrchengewicht subtrahieren. Geben Sie einen Milliliter sterilen SM-Puffer in das Röhrchen und wirbeln Sie es mit maximaler Geschwindigkeit auf, um die Kotpellets zu homogenisieren.
Notieren Sie das Volumen des SM-Puffers, das jeder Probe zugesetzt wird, für koloniebildende Einheiten oder KBE- oder PFU-Berechnungen pro Gramm. Bereiten Sie eine Reihe von acht seriellen Verdünnungen von 20 Mikrolitern jeder Probe in 180 Mikrolitern SM-Puffer vor. Fünf Mikroliter jeder Verdünnung auf eine LB-Agarplatte mit E.coli oder nur auf LB-Agarplatten geben, um die T4-Phagen- und E.coli-Konzentration zu bestimmen.
Lassen Sie jede Stelle trocknen, bevor Sie die Platten umdrehen und über Nacht bei 37 Grad Celsius inkubieren. Wählen Sie am nächsten Tag die Verdünnung mit drei bis 30 zählbaren Plaques pro Stelle. Zählen und notieren Sie die Anzahl der verwendeten Plaques und Verdünnungen.
Teilen Sie die Anzahl der Plaques durch das Volumen, das an jeder Stelle plattiert ist, um PFU pro Mikroliter zu erhalten. Multiplizieren Sie dies mit dem Verdünnungsfaktor und dem Volumen des SM-Puffers, das jeder Probe für PFU pro Probe zugesetzt wird. Teilen Sie schließlich durch das Probengewicht, um PFU pro Gramm Probe zu erhalten.
Die Konzentrationen von T4-Phagen und E.coli, die in Mäusen nachgewiesen wurden, denen zwei mal 10 bis sechs PFU von T4-Phagen oder ein Vehikellysat injiziert wurden, zeigten die Koexistenz von T4-Phagen und E.coli ohne Erschöpfung einer der beiden Populationen über vier Wochen. Niedrigere Dosen von T4-Phagen hatten keinen Einfluss auf die Kolonisation im Vergleich zu zwei um 10 bis zur sechsten PFU und es wurde keine dosisabhängige Wirkung auf die E.coli-Spiegel beobachtet.
