Geben Sie zunächst 30 Mikroliter Concanavalin-A-Kügelchen in ein 1,5-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Pipettieren Sie 300 Mikroliter Bindungspuffer auf die Kügelchen. Drehen Sie das Röhrchen mehrmals um, um es gut zu mischen, und stellen Sie es dann auf ein magnetisches Gestell.
Sobald die Lösung geklärt ist, pipettieren Sie den Überstand heraus. Pipettieren Sie 300 Mikroliter Bindungspuffer in das Röhrchen, nachdem Sie es aus dem Gestell genommen haben. Erneut umkehren, um den Inhalt des Rohres zu vermischen.
Verteilen Sie den Inhalt des Röhrchens gleichmäßig auf drei Röhrchen mit acht PCR-Röhrchenstreifen und legen Sie dann den Röhrchenstreifen auf das Magnetgestell, bis die Lösung geklärt ist. Nach Entfernen des Überstands 10 Mikroliter Bindungspuffer in die Röhrchen pipettieren und mischen. Lege die vorbereiteten Kügelchen bis zum weiteren Experimentieren auf Eis.
Als nächstes trypsinisieren Sie kultivierte Mausmyoblasten von den Platten. Nach dem Zentrifugieren der Zellen wird der Überstand mit Vakuum mit Vakuum entfernt. Dann resuspendieren Sie das Pellet in PBS.
Zentrifugieren Sie die Zellen, nachdem Sie eine Zellzählung der Suspension durchgeführt haben, und resuspendieren Sie dann das Pellet in einem ausreichenden Volumen Waschpuffer, um eine Zelldichte von 700.000 Zellen pro Milliliter zu erzeugen. Pipettieren Sie 100 Mikroliter dieser Zellsuspension in jedes Röhrchen des PCR-Röhrchenstreifens und mischen Sie es gut, dann legen Sie den Röhrchenstreifen 10 Minuten lang bei Raumtemperatur auf einen Wippen-Bewegungsschüttler, damit die Concanavalin-A-Kügelchen die Zellen einfangen können. Klären Sie den Inhalt der Röhrchen noch einmal auf einem Magnetgestell auf, bevor Sie den Überstand herauspipettieren.
Beobachten Sie abschließend den Überstand unter einem Mikroskop, um die Wirksamkeit der Bindung von Concanavalin-A-Kügelchen an die Zellen zu beurteilen.
