Lösen Sie zunächst die mit Bromphenolblau-Farbstoff injizierte Maus aus dem stereotaktischen Rahmen. Befestigen Sie die Maus nach der Narkose mit Klebeband auf einer Schaumstoffplatte. Machen Sie einen ein bis zwei Millimeter großen Schnitt im rechten Vorhofohr.
Führen Sie eine Infusionsnadel in die linke Herzkammer ein. Infusion von 20 Millilitern vorgekühlter Kochsalzlösung, gefolgt von 20 Millilitern eisgekühlter 4%iger Paraformaldehydlösung. Machen Sie nun einen Schnitt entlang der Mittellinie vom Hals bis zur Nase, um die Haut zu entfernen und den Schädel freizulegen.
Verwenden Sie eine Pinzette oder eine Schere, um verbleibende Muskeln am Schädel zu entfernen. Platzieren Sie die Spitze einer Klinge der feinen Schere zwischen dem Foramen magnum und dem Gehirn mit einer scharfen Kante in Richtung Knochen am rostralen Ende der Mittelsagittalnaht. Schieben und schneiden Sie den Schädel vorsichtig entlang der mittelsagittalen Naht.
Verwenden Sie eine Pinzette, um den Schädel zu entfernen und das Gehirn freizulegen. Stellen Sie nach dem Einschalten des Rotationsmikrotom-Kryostaten die Kammertemperatur auf minus 20 Grad Celsius ein. Gießen Sie ein wenig optische Schnitttemperatur oder OCT-Verbindung ein, um die Oberfläche der Probenscheibe gleichmäßig zu bedecken.
Legen Sie die Probenscheibe in die Kryokammer und lassen Sie das OCT erstarren. Befestigen Sie die Scheibe am Probenkopf. Bringen Sie dann die Klinge näher an den Block heran und schneiden Sie den OCT-Block so ab, dass eine flache Ebene parallel zur Scheibe entsteht.
Schneiden Sie das Gehirn mit einer Rasierklinge in koronaler Richtung weg von der Injektionsstelle in eine Gehirnschnittform. Platzieren Sie das Hirngewebe, das die Injektionsstelle enthält, mit der Schnittseite nach unten auf der flachen OCT-Ebene. Gießen Sie OCT auf das Gehirn und legen Sie die Scheibe in die Kryokammer, damit sich der Probenblock verfestigen kann.
Schneiden Sie den Probenblock ab, bis sich der Zielbereich nähert, und machen Sie mehrere Schnitte von der Ebene der Injektionsstelle aus. Verwenden Sie eine gekühlte kleine Schreibbürste, um die koronalen Gehirnscheiben in eine Sechs-Well-Platte mit PBS bei Raumtemperatur zu sammeln. Nehmen Sie mit einem Pinsel die Gehirnabschnitte von der Sechs-Well-Platte und legen Sie sie auf einen Objektträger.
Beobachten Sie nach dem Trocknen visuell die injizierte Region in den Gehirnabschnitten.
