Verbindung von humanen Uterusfibroblasten-ausgesäten Organchips mit Pods und Differenzierung von vaginalen Epithelzellen zur Untersuchung des lebenden vaginalen Mikrobioms

Zu Beginn nehmen Sie jeweils 50 Milliliter, ein Fibroblastenmedium und ein vaginales Epithelmedium, in separate konische 50-Milliliter-Röhrchen. Entgasen Sie das erwärmte Medium fünf Minuten lang unter einem sterilen Vakuum. Als nächstes werden die sauberen Tabletts mit CaviCide und Ethanol für das dynamische Durchflussmodul desinfiziert.

Nehmen Sie die Pods aus der Verpackung und legen Sie sie in die Trays des Dynamic Flow-Moduls. Pipettieren Sie zwei Milliliter entgastes vaginales Epithelmedium in das apikale Einlassreservoir. Und geben Sie drei Milliliter entgastes Fibroblastenmedium in das basale Einlassreservoir.

Pipettieren Sie 500 Mikroliter entgastes vaginales Epithelmedium in das apikale Auslassreservoir und 500 Mikroliter entgastes Fibroblastenmedium in das basale Auslassreservoir. Schieben Sie die Tabletts mit den Pods in das dynamische Flussmodul. Führen Sie nun den Primzyklus zweimal aus.

Wenn sich nach vier Prime-Zyklen kein Tröpfchen bildet, stellen Sie direkten Kontakt mit dem Anschluss im Auslassbehälter des Pods her. Pipettieren Sie 200 Mikroliter des jeweiligen Mediums, damit das Medium zwischen dem Reservoir im Kanal fließen kann, um die Pods von Hand zu entlüften. Entfernen Sie als Nächstes die Pipettenspitzen von menschlichen Uterus-Fibroblasten-Organchips.

Platzieren Sie ein Tröpfchen des entsprechenden Mediums über alle Ports jedes Chips. Schieben Sie die Chips in die Pods und legen Sie die Pods auf die Tabletts. Saugen Sie alle Medien auf der Oberfläche der Chips an und schieben Sie dann jedes Fach in ein dynamisches Durchflussmodul.

Stellen Sie dann auf dem Modul die Ober- und Unterseite als Flüssigkeit ein, den apikalen Fluss auf 15 Mikroliter pro Stunde, den basalen Fluss auf 30 Mikroliter pro Stunde, die Dehnung auf 0 % und die Frequenz auf null Hertz. Führen Sie den Regelzyklus am Modul durch und lassen Sie den Durchfluss über Nacht zu. Auf dem Organchip-Gerät wurde eine kontinuierliche Schicht von vaginalen Epithelzellen beobachtet, die nach der Differenzierung nach und nach mehrere Zellschichten bildeten.