Pipettieren Sie zunächst 92,7 Mikroliter Puffer A in ein leeres 1,5-Milliliter-Röhrchen. Fügen Sie dann DTT, Natrium-ADP, Magnesiumchlorid, L-Ornithin und die Enzyme hinzu. Nachdem Sie die Lösung vorsichtig gemischt haben, fügen Sie sie zu 66,6 Mikrolitern der vorgeformten Proteoliposomen hinzu.
Frosten Sie die Mischung in flüssigem Stickstoff ein und tauen Sie sie dann in einem Wassereisbad bei etwa 10 Grad Celsius auf. Die Verkapselungsmischung im Extruder wird 13 Mal durch einen Filter geleitet, der mit Puffer A, DTT, Natrium-ADP und L-Ornithin voräquilibriert ist, und die extrudierte Lösung in einem 1,5-Milliliter-Röhrchen auffangen. Um die Synthese von ATP zu bestimmen, pipettiert man den Puffer K, die Proteoliposomen und die Ionophore in eine schwarze Quarzküvette mit einem kleinen Fenster.
Die Probe wird in einem Fluorimeter auf 30 Grad Celsius vorgewärmt. Erfassen Sie nun die Anregungsspektren der percevalen HR. Wenn das Sondensignal konstant ist, fügen Sie einen Überschuss an L-Arginin und Glycerin hinzu, um das Stoffwechselnetzwerk zu starten und die Reaktion im Laufe der Zeit zu verfolgen. Die Zugabe von L-Arginin zu den Proteoliposomen führte zu einem steilen Anstieg des Verhältnisses der percevalen HR-Fluoreszenz bei 500 und 430 Nanometern Anregung.
