Nachdem Sie die Haare der Maus betäubt und entfernt haben, legen Sie sie auf ein Heizkissen, das mit einer Autoklaven-OP-Matte umwickelt ist. Richten Sie den Körper sanft auf und heben Sie die Haut entlang der Wirbelsäule an. Zeichnen Sie mit einem chirurgischen Marker einen einzelnen Punkt auf einer Seite der Maus in der Mitte der Zelthaut.
Nach der Züchtung der BXPC, drei menschlichen Bauchspeicheldrüsenkrebs-Zelllinien für zwei Wochen. Nehmen Sie den Kolben aus dem Inkubator und stellen Sie ihn in die biologische Sicherheitswerkbank. Aspirieren Sie das Medium und waschen Sie die Zellen mit fünf Millilitern PBS.
Fünf Milliliter Zelldissoziationsmittel in den Kolben geben und bei 37 Grad Celsius mit 5 % Kohlendioxid sechs bis sieben Minuten inkubieren. Die Zellsuspension wird in ein 15-Milliliter-Röhrchen überführt und fünf Minuten lang bei 500 g zentrifugiert. Nach Entfernen des Überstands werden die Zellen in vollständigen Wachstumsmedien resuspendiert.
Bestimmen Sie mit einem Hämozytometer die Zellkonzentration und die Gesamtzellzahl. Zentrifugieren Sie eine 1,5-Milliliter-Suspension mit 250.000 Zellen pro Maus, die fünf Minuten lang bei 500 g geimpft wird. Nachdem Sie den Überstand entfernt haben, resuspendieren Sie das Pellet in 10 Mikrolitern PBS pro zu beimgender Maus und legen Sie das Röhrchen auf Eis.
Geben Sie mit gekühlten Pipettenspitzen eine lösliche Basalmembran in das Röhrchen. Laden Sie die gekühlte 29-Gauge-Insulinnadel mit 20 Mikrolitern der Zellsuspension und legen Sie die Spritze auf Eis. Führen Sie die Nadel etwa einen Zentimeter entfernt an den markierten Punkt der Maus ein und bewegen Sie die Nadel unter der Haut, bis sie sich am Orientierungspunkt befindet, mit der abgeschrägten Seite der Nadel nach oben.
Injizieren Sie 20 Mikroliter Zellsuspension und warten Sie 45 Sekunden, bevor Sie die Spritze entfernen. Nachdem Sie die Maus aus der Narkose genommen haben, warten Sie, bis sie gehfähig wird, bevor Sie in ihren Heimatkäfig zurückkehren.
