PCR-Amplifikation und Adapterligation der Zielsequenz für den Multigen-SNP-Nachweis beim Magenkrebs

Nehmen Sie zunächst die Nukleinsäuren, die aus den in Paraffin eingebetteten Magenkrebsgewebeproben extrahiert wurden. Legen Sie die Komponenten des maßgeschneiderten Kits zur Erkennung von Magenkrebs mit mehreren Genen auf Eis. Nachdem Sie die Komponenten gründlich gemischt haben, zentrifugieren Sie sie 10 Sekunden lang, geben Sie dann nacheinander Reagenzien in ein 0,2-Milliliter-PCR-Röhrchen und mischen Sie sie fünf Sekunden lang durch Vortexen.

Platzieren Sie jedes Reaktionsröhrchen auf dem Thermocycler und führen Sie das Amplifikationsprogramm für DNA-Proben und cDNA-Produkte durch. Tauen Sie das Primer-Verdauungsenzym auf Eis auf. Geben Sie zwei Mikroliter Primer-Aufschlussenzym in jedes Reaktionsröhrchen.

Nachdem Sie die Röhrchen vortexiert und zentrifugiert haben, legen Sie sie auf den Thermocycler und führen Sie das Aufschlussprogramm durch. Tauen Sie den Adapter, der die Reagenzien verbindet, auf Eis auf. Beschriften Sie ein 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenröhrchen als Adaptermischung X und fügen Sie die erforderlichen Komponenten hinzu.

Entnehmen Sie das aufgeschlossene Primerprodukt aus dem Thermocycler. Geben Sie die Ligationsreagenzien in das Röhrchen, wirbeln Sie es fünf Sekunden lang vor und zentrifugieren Sie es 10 Sekunden lang bei niedriger Geschwindigkeit bei 2.500 G. Legen Sie dann das Röhrchen auf den Thermocycler und führen Sie das Amplifikationsprogramm für DNA-Proben und cDNA-Produkte durch.