Zu Beginn werden fünf Milliliter eines angesäuerten Kulturüberstands von Pseudomonas aeruginosa in ein 50-Milliliter-Polypropylenröhrchen überführt. Geben Sie fünf Milliliter Chloroform-Methanol-Gemisch in dieses Röhrchen. Drehen Sie das Röhrchen dreimal für 30 Sekunden um, um die Lösung zu rühren und zu mischen.
Lassen Sie das Rohr zwischen jedem Rühren zwei Minuten lang ohne Umkehrung. Zentrifugieren Sie das Röhrchen 10 Minuten lang bei 3000 g bei vier Grad Celsius und überführen Sie dann die organische Phase in ein sauberes Röhrchen. Lassen Sie das Rohr in einer Absaughaube, bis es getrocknet ist.
Verwenden Sie anschließend eine 10-Mikroliter-Pipette, um fünf Mikroliter der Proben auf eine DC-Platte aufzutragen. Zur Vorbereitung der flüssigen Phase mischen Sie 26 Milliliter Chloroform, sechs Milliliter Methanol und 0,8 Milliliter 20%ige Essigsäure. Geben Sie die Lösungsmittelmischung für mindestens 10 Minuten in eine geschlossene DC-Kammer, um sie zu sättigen.
Übertragen Sie die DC-Platte in die Kammer und vermeiden Sie dabei den Kontakt mit den Probenapplikationspunkten. Lassen Sie die DC-Platte in der geschlossenen Kammer, bis das Lösungsmittel einen Zentimeter vor dem Rand der Platte ankommt. Nehmen Sie an dieser Stelle die Platte heraus und lassen Sie sie trocknen.
Um das Vorhandensein von Rhamnolipiden nachzuweisen, sprühen Sie Alpha-Naphthhollösung auf die Platte in der Extraktionshaube und stellen Sie dann eine besprühte Platte einige Minuten lang bei 85 Grad Celsius in einen Ofen, bis die rosafarbene Markierung des Rhamnolipidlipids sichtbar ist. Alle drei Pseudomonas aeruginosa-Stämme produzieren unterschiedliche Mengen an Mono- und Dirhamnolipiden.
