Präparation funktionalisierter magnetischer Nanopartikel für die zeitaufgelöste Fluoreszenzbildgebung

Fügen Sie zunächst Streptavidin-funktionalisierte Nanopartikel zu Röhrchen hinzu, um den Nachweis von TNF alpha, Interleukin-1 beta und Interleukin-6 zu ermöglichen. Verdünnen Sie das Streptavidin plus Nanopartikel in gleichen Mengen PBS. Geben Sie dann die biotinylierten Capture-Antikörperlösungen in Röhrchen und inkubieren Sie sie 30 Minuten lang bei Raumtemperatur.

Geben Sie anschließend 0,01 % 1 millimolare D-Biotin-Lösung in jedes Röhrchen und inkubieren Sie fünf Minuten lang. Halten Sie dann einen Neodym-Magneten in die Nähe des Rohrs, um die Partikel aufzufangen. Der klare Überstand wird verworfen und die Nanopartikel werden sofort in einer Mischung aus Pluronic F-127 und PBS resuspendiert und 30 Minuten lang inkubiert.

Nachdem Sie die Partikel 30 Minuten lang in Lagerpuffer inkubiert haben, rühren Sie sie, um eine gleichmäßige Mischung zu gewährleisten. Unmittelbar vor der Verkapselung kombinieren Sie die konjugierten Nanopartikel für Interleukin-6, TNF alpha und Interleukin-1 beta. Waschen Sie nun die Partikel mit dem Magneten mit vollständigem Medium, wie zuvor gezeigt, und resuspendieren Sie die Kügelchen in vollständigem Medium.

Fügen Sie anschließend Nachweisantikörper für Interleukin-6, TNF alpha und Interleukin-1 beta hinzu, um die endgültige Konzentration von 10 Nanomolar zu erreichen.