Identifizieren Sie zunächst die weiblichen immundefizienten NSG-Mäuse mit leptomeningealer Erkrankung (LMD). Legen Sie eine betäubte Maus auf den Operationstisch. Positionieren Sie die Nase der Maus in einem modifizierten L-förmigen Kegel eines stereotaktischen Geräts, wobei Sie darauf achten, dass die Nasenlöcher frei bleiben.
Ziehen Sie die Haut sanft über die Bauchflächen beider Ohrmuscheln nach vorne und fixieren Sie sie dann mit Klebeband am Nasenkegel. Führen Sie die chirurgischen Scherenspitzen von den Ohrmuscheln nach unten über das Hinterhauptbein. Schaffen Sie einen kleinen Mittellinienschnitt von fünf bis sieben Millimetern direkt über der palpierten Konkavität.
Üben Sie mit einer stumpfen Pinzette mit ein bis zwei Millimeter Spitze sanften Druck auf die Cisterna magna aus. Führen Sie die Spitzen in geschlossener Position ein und öffnen Sie sie, während Sie Druck nach unten auf die Dura ausüben. Führen Sie die stumpfe Dissektion so lange durch, bis die Duralmembran deutlich erkennbar ist und die zugehörigen Blutgefäße im freiliegenden Bereich sichtbar sind.
Halten Sie nun die Pinzette offen, um die umliegende Muskulatur zurückzuziehen. Befestigen Sie dann eine 27- bis 29-Gauge-Nadel an einer Ein-Milliliter-Spritze. Führen Sie die Spritze unter die Dura ein, um die Fase sichtbar zu machen.
Ziehen Sie den Spritzenkolben nach und nach zurück, um so viel Liquor cerebrospinalis wie möglich aufzufangen. Übertragen Sie die Flüssigkeit in ein Mikrozentrifugenröhrchen. Sofort auf Eis legen.
Zentrifugieren Sie die Probe bei 257 g fünf Minuten lang bei vier Grad Celsius. Nach dem Aspirieren des Überstands pipettieren Sie 500 Mikroliter steriles PBS in das Zellpellet. Zentrifugieren Sie das Pellet bei 257 g fünf Minuten lang bei Raumtemperatur.
Entsorgen Sie den Überstand und geben Sie das Pellet dann in eine 96-Well-Platte mit HMC-konditioniertem Medium.
