Etablierung von patientenabgeleiteten Luft-Flüssigkeits-Grenzflächenkulturen (ALI) aus Speiseröhrenbiopsien

Zu Beginn nehmen Sie Zellen, die aus Speiseröhrenbiopsien isoliert wurden, und resuspendieren Sie sie in vier Millilitern KSFM mit 10 mikromolaren Y27632. Übertragen Sie die Zellen in einen T25-Zellkulturkolben. Sobald die Keratinozyten eine Monoschicht mit einer Konfluenz von 60 % bis 80 % bilden, passieren die P1-Zellen.

Anschließend werden die primären P2-Keratinozyten auf TRANSWELL-Inserts für die Luft-Flüssig-Grenzflächenkultur ausgeimpft. Um am siebten Tag einen Lufttransport durchzuführen, ersetzen Sie das Medium in der unteren Kammer durch KSFM mit hohem Kalziumgehalt und saugen Sie das Medium aus der oberen Kammer an.