Verfahren zur Fixierung von Organoiden und nach der Fixierung für die TEM-Probenvorbereitung

Um mit der anterioren Fixierung der induzierten pluripotenten Stammzellen abgeleiteten retinalen Organoide oder ROs zu beginnen. Bewegen Sie mit einer Pipette vorsichtig eines der kultivierten ROs aus der Petrischale in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen. Entfernen Sie mit Hilfe einer Pipette das Nährmedium aus dem Mikrozentrifugenröhrchen und fügen Sie 1,5 Milliliter 2 % Paraformaldehyd und 2 % Glutaraldehyd-Fixiermittel hinzu.

Nachdem die ROs fixiert sind, entfernen Sie das Paraformaldehyd-Glutaraldehyd-Fixiermittel, bevor Sie mit dem Waschen der Organoide fortfahren. Suspendieren Sie die Organoide vorsichtig im Mikrozentrifugenröhrchen, indem Sie 1 Milliliter 0,01 molare PBS hinzufügen, um eine vollständige Reinigung zu gewährleisten. Pipettieren Sie dann das restliche PBS heraus und ersetzen Sie es durch ca. 150 Mikroliter 1%ige Osmisäure, bis die Gewebeblöcke untergetaucht sind.

Legen Sie das Mikrozentrifugenröhrchen in eine dunkle Box.