Nachdem Sie die Maus eingeschläfert haben, präparieren Sie die TA- und GA-Muskeln von beiden Hintergliedmaßen und legen Sie sie in den Deckel einer Petrischale. Schneide das Taschentuch mit einer Schere in eine zerkleinerte Gülle. Übertragen Sie das zerkleinerte Gewebe in ein 50-Milliliter-Röhrchen mit fünf Millilitern eiskaltem Dissoziationspuffer und bewahren Sie es auf Eis auf.
Sobald die Probenröhrchen auf 37 Grad Celsius erhitzt sind, inkubieren Sie sie 45 Minuten lang im Wechsel in einem Inkubator. Geben Sie 10 Milliliter Waschmedium in die Probenröhrchen und wirbeln Sie sie ein. Zentrifugieren Sie die Röhrchen und saugen Sie den Inhalt auf vier Milliliter an.
Geben Sie anschließend jeweils 0,5 Milliliter Kollagenase und Dispase in die Zellen. Dann werden sie verwirbelt und inkubiert. Nach der Inkubation zentrifugieren Sie die aufgeschlossene Probe und resuspendieren Sie das Pellet mit einer Fünf-Milliliter-Pipette.
Anschließend befeuchten Sie die 40-Mikrometer-Küvettensiebe, die auf 50-Milliliter-Röhrchen platziert sind, mit fünf Millilitern Waschmedium. Verwenden Sie eine Fünf-Milliliter-Spritze mit einer 20-Gauge-Nadel, aspirieren und stoßen Sie die Zellsuspension 10 Mal aus. Anschließend wird die Zellsuspension durch das vorbenetzte 40-Mikrometer-Zellsieb abgeseiht.
Nachdem Sie die restlichen Zellen gesammelt und mit 10 Millilitern Waschmedium abgeseiht haben, pelletieren Sie die Zellsuspension durch Zentrifugation, saugen Sie den Überstand aus dem Rohr an und schnippen Sie vorsichtig mit dem Pellet, um es zu lösen.
