Starten Sie zunächst die Datenanalysesoftware auf einem Desktop-Computer. Klicken Sie auf Datei, dann auf Browser und wählen Sie Ordner auswählen, um den Ordner mit den erfassten Bilddaten zu öffnen. Wählen Sie mehrere Zeilen aus, die sich auf die ausgewählten Bilder beziehen, einschließlich der nicht infizierten Steuerelemente und ohne die übersättigten Bilder.
Notieren Sie sich die Bild-ID in einem Labornotizbuch zusammen mit den Informationen, die während einer zweiten Bildgebungssitzung registriert wurden. Klicken Sie auf Als Gruppe laden, um die ausgewählten Bilder zusammenzustellen. Klicken Sie nun auf das Speichern-Symbol, um das neue Sequenzbild in einem neuen Ordner zu speichern, um die Rohdaten bei Bedarf erneut zu analysieren.
Klicken Sie anschließend auf Optionen gefolgt von Anzeige und wählen Sie Binning-Faktor aus, um das für jedes Bild verwendete Binning zu identifizieren. Der erfasste Binning-Faktor wird oben in jedem Bild in der Sequenz angezeigt. Um alle Binning-Faktoren auf den gleichen Wert zu korrigieren, doppelklicken Sie zunächst auf das Bild, das angepasst werden soll.
Klicken Sie im Tool-Pal-Fenster auf die Option zum Anpassen des Bildes und wählen Sie dann den entsprechenden Binning-Faktor aus. Doppelklicken Sie auf das Bild der nicht infizierten Mäuse und wählen Sie dann die Option Anzahl der Mäuse im Einheitenfeld aus. Stellen Sie die Farbskala auf einen Mindestwert von 600 ein.
Wählen Sie die Strahlstärkeoptionen im Feld "Einheiten" aus, um die Strahldichte des resultierenden Bildes anzuzeigen. Wählen Sie bei aktivem Sequenzfenster die Option Strahlstärke im Feld Einheiten. Deaktivieren Sie das einzelne Feld im Bereich "Grenzen der Farbskala", um die Farbskala und die Farbtabelle in der Werkzeugpalette anzupassen.
Markieren Sie die logarithmische Skala und die manuellen Kästchen und stellen Sie dann die maximale Skalenzahl gemäß der nicht infizierten Kontrolle und den Bereich mit dem höchsten Signal als Maximum ein. Nachdem Sie den gleichen Maßstab für alle Bilder eingestellt haben, doppelklicken Sie auf jedes Bild, maximieren Sie das Fenster und verwenden Sie die Option Grafiken exportieren, um die Bildansicht in einem Bildformat zu exportieren. Benennen Sie die Dateien nach Behandlung, gefolgt von der Mäuse-ID und dem Zeitpunkt.
Doppelklicken Sie auf das Bild aus der Sequenz. Klicken Sie im Fenster der Werkzeugpalette auf den Abschnitt ROI-Werkzeug und drücken Sie dann auf das quadratische Symbol. Zeichnen Sie ein Rechteck über die gesamte Maus.
Klicken Sie auf den Rand des erstellten ROI und kopieren Sie den gleichen ROI für jede Maus und fügen Sie ihn ein. Benennen Sie als Nächstes die ROIs, die aufgezeichnet werden sollen. Klicken Sie dann auf das Speichersymbol im Abschnitt ROI-Tool.
Aktivieren Sie das Kontrollkästchen Auf Sequenz anwenden. Wenden Sie dann die gespeicherten ROIs für alle Bilder an, indem Sie auf Laden klicken. Passen Sie die Position des ROI für jede Maus an, um sie besser in den Messbereich einzufügen.
Wenn alle Mäuse beschriftet wurden, klicken Sie auf die Option ROIs messen. Die Tabelle mit den ROI-Messungen sollte angezeigt werden. Stellen Sie die Messarten auf Strahlstärke, die Bildattribute auf alle möglichen Werte und die ROI-Dimensionen auf Zentimeter ein.
Klicken Sie dann auf die Option Alle auswählen, gefolgt von Kopieren. Fügen Sie die Daten direkt in die Tabellenanalysesoftware ein. Organisieren Sie die Datenspalten, um die Gruppen richtig zu sortieren.
Als Nächstes kennzeichnen Sie die Daten in der Tabelle nach Gruppen. Ordnen Sie die Gesamtflusswerte so an, dass sie mit den ventralen und dorsalen Gesamtflusswerten derselben Maus übereinstimmen. Addieren Sie sie dann, um die Ganzkörper-Biolumineszenz jeder Maus zu erhalten.
Berechnen Sie den Mittelwert und die Standardabweichung der summierten Werte für jede Gruppe. Plotten Sie die Daten in eine Statistiksoftware, um Diagramme zu erstellen. Erstellen Sie abschließend ein Panel mit biolumineszierenden Bildern.
Platzieren Sie jede Maus in Spalten und die Zeitpunkte in Zeilen, um eine Wirksamkeitsmatrix für das Medikament zu erstellen. Wenn die Biolumineszenzmethode zur Bewertung von Antiparasitika angewendet wird, wird eine Arzneimittelwirksamkeitsmatrix erstellt, um Testverbindungen, hier beispielhaft durch Posaconazol, mit der Standardmedikamentenbehandlung für die Chagas-Krankheit, Benznidazol in einer Menge, die einmal täglich verabreicht wird, zu vergleichen. In dieser Längsschnittstudie wird der zeitliche Verlauf der Infektion durch den Vergleich einer nicht behandelten Gruppe mit einer behandelten Gruppe veranschaulicht.
Die Ergebnisse zeigen entweder eine Verringerung der Parasitenbelastung, was sich in einer verminderten Biolumineszenz zeigt, oder ein Rückfall, der sich in einer erhöhten Parasitenlast und einer daraus resultierenden Lichtdetektion zeigt, was auf eine unwirksame Substanz oder ein unwirksames Behandlungsschema hindeutet. Das quantifizierte Licht wird durch die Summe des ventralen und dorsalen Gesamtflusses in Photonen pro Sekunde in Abhängigkeit von der Infektionszeit dargestellt.
