Nehmen Sie zunächst das Kryofläschchen mit CD34+-Zellen aus Nabelschnurblut aus dem Gefrierschrank. Tauen Sie die Zellen in einem Wasserbad auf, bevor Sie sie in ein 50-Milliliter-Röhrchen umfüllen. Während Sie das Röhrchen tropfenweise schütteln, geben Sie das 10-fache des Zellvolumens von vorgewärmtem IMDM mit 50 % FBS und 0,1 Milligramm pro Milliliter DNase in das Röhrchen.
Die Zellsuspension wird fünf Minuten lang bei 500 g zentrifugiert. Resuspendieren Sie das Pellet in 20 bis 40 Mikrolitern PBS, das Penicillin und Streptomycin enthält. Lagern Sie die Zellen bis zur Verwendung auf Eis.
Bereiten Sie eine Drei-Milliliter-Spritze mit einer 27-Gauge-Half-Inch-Nadel vor. Bereiten Sie eine 0,5-Milliliter-Insulinspritze mit einer 29-Gauge-Nadel mit 12,7 Millimetern vor, die Nabelschnurblut-CD34+-Zellsuspension enthält. Bereiten Sie als Nächstes eine Ein-Milliliter-Insulinspritze mit einer 29-Gauge-0,5-Zoll-Nadel mit 100 Mikrolitern Buprenorphin vor.
Übertragen Sie die anästhesierte Maus in einen Nasenkegel und führen Sie eine Zehenkneifung durch, um ihre Bereitschaft für die Injektion zu bestätigen. Lege die Maus auf den Rücken und beuge die Hinterbeine. Um die Hinterbeine zu sichern, lege den Daumen der nicht-dominanten Hand auf den Fuß, den Mittelfinger auf die Hüfte und den Zeigefinger auf die Außenseite des Oberschenkelknochens.
Zupfen Sie die Haare vorsichtig um die Kniescheibe herum und wischen Sie die Stelle mit einem Alkoholtupfer ab. Bohren Sie nun mit einer Drei-Milliliter-Spritze und einer 27-Gauge-Half-Inch-Nadel vorsichtig ein Loch durch die Haut in Richtung Oberschenkelknochen. Sobald sich die Nadel im Knochen befindet, drehen Sie sie im Uhrzeigersinn, bis sich die gesamte Nadel im Knochen befindet.
Entfernen Sie die Nadel mit einer Drehung gegen den Uhrzeigersinn bis zur Hälfte nach außen. Wischen Sie mit einem Alkoholtupfer über die Nadel und drehen Sie die Nadel weiter gegen den Uhrzeigersinn, um sie vollständig zu entfernen. Führen Sie anschließend die 0,5-Milliliter-Insulinspritze mit der Zellsuspension in den Femurschaft ein.
Sobald sich die Nadel im Knochen befindet, lösen Sie den Griff am Bein und injizieren Sie vorsichtig 25 Mikroliter Suspension in den Oberschenkelknochen. Zum Schluss injizieren Sie das Buprenorphin subkutan und bringen Sie die Maus in ihren Heimatkäfig zurück, damit sie sich von der Narkose erholen kann.
