Nach der Enthauptung sterilisieren Sie den Körper der betäubten Neugeborenenmaus mit 70% Ethanol. Machen Sie mit einer Pinzette und einer chirurgischen Schere mit feiner Spitze einen Schnitt zwischen dem Bauch und den Hinterbeinen. Entfernen Sie dann die Haut, indem Sie sie in Richtung des Fußes der Hintergliedmaßen ziehen.
Kratzen Sie das Bindegewebe und die Muskeln, die an den Knochen befestigt sind, mit einer scharfkantigen Pinzette ab. Schneiden Sie das Schienbein und den Oberschenkelknochen mit einer Schere ab. Platzieren Sie Tibia und Femur mit einer Pinzette in einem MEM-Kulturmedienröhrchen auf Eis.
Übertragen Sie die Knochen in ein 40-Mikron-Sieb mit einem Sammelröhrchen. Zerdrücken Sie die Knochen mit einem Drei-Milliliter-Spritzenkolben gegen das Sieb, um das Mark freizugeben. Die Zellsuspension wird bei 350 g fünf Minuten lang bei vier Grad Celsius zentrifugiert.
Aspirieren Sie den Überstand und suspendieren Sie die Zellen vorsichtig wieder in 0,2%igem Natriumchlorid, um eine hypotone Lösung für die Lyse von Erythrozyten herzustellen. Fügen Sie sofort ein gleiches Volumen von 1,6% Natriumchlorid hinzu, um die Lösung isotonisch zu machen. Zentrifugieren Sie den Überstand und entfernen Sie die Lyselösung.
Suspendieren Sie die Zellen erneut in vollständigem DMEM und zählen Sie die Zellen auf einem automatisierten Zellzähler.
