Entnehmen Sie zunächst die Platte mit Zellkultureinsätzen mit Organoid-abgeleiteten 2D-Monoschichten aus dem Inkubator. Entfernen Sie das Monolayer-Kulturmedium sowohl aus der apikalen als auch aus der basolateralen Kammer der zu beurteilenden Zellkultureinsätze. Waschen Sie die apikale und die basale Kammer zweimal vorsichtig mit 200 und 500 Mikrolitern vorgewärmtem PBS.
Entfernen Sie die Waschlösung aus der apikalen Kammer und tragen Sie 200 Mikroliter 0,5 Milligramm pro Milliliter vier Kilodalton FITC-Dextran-Tracer in PBS auf die apikale Kammer des Zellkultureinsatzes auf. Inkubieren Sie die Platte in einem befeuchteten Inkubator bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid für 20 Minuten. Nehmen Sie dann eine Probe von 50 Mikrolitern aus der basolateralen Kammer der inkubierten 24-Well-Platte und übertragen Sie sie auf eine 96-Well-Platte, die mit einem Mikroplatten-Reader kompatibel ist.
Setzen Sie 50 Mikroliter frisches PBS in die basolaterale Kammer der beprobten Vertiefung ein. Messen Sie mit einem vorkalibrierten Mikroplatten-Reader sofort die Fluoreszenzintensität bei einer Anregungswellenlänge von 495 Nanometern und einer Emissionswellenlänge von 535 Nanometern.
