Zentrifugieren Sie zunächst die geronnenen bluthaltigen Röhrchen bei 626 bis 1.409 g für 20 Minuten bei zwei bis acht Grad Celsius. Sammeln Sie dann vorsichtig den Überstand in einem neuen Röhrchen. Lagern Sie den Überstand bei minus 80 Grad Celsius.
Richten Sie als Nächstes leere Standard- und Probenvertiefungen ein. Pipettieren Sie 50 Mikroliter der verdünnten Standards in die ELISA-Platte. Übertragen Sie dann 40 Mikroliter der verdünnten Proben in die Probenvertiefungen.
Geben Sie 10 Mikroliter Serum in die Probenvertiefungen. Versiegeln Sie nun die Platte mit einer Siegelfolie. Legen Sie die versiegelte Platte für 30 Minuten bei 37 Grad Celsius in einen Inkubator.
Verdünnen Sie die 30-fach konzentrierte Waschlösung mit destilliertem Wasser, um eine Waschlösung mit einfacher Stärke zu erhalten. Entfernen Sie anschließend die Siegelfolie von der Platte und entsorgen Sie die Flüssigkeit. Füllen Sie nun jede Vertiefung fünfmal mit 200 Mikrolitern Waschlösung.
Nachdem Sie den Überstand ein letztes Mal entsorgt haben, klopfen Sie die Platte trocken. Pipettieren Sie 50 Mikroliter des Enzymreagenzes in alle Vertiefungen außer den blinden. Anschließend verschließen Sie die Platte mit einer Siegelfolie, bevor Sie sie für 30 Minuten in einen Inkubator bei 37 Grad Celsius legen.
Nachdem Sie die Platte noch fünfmal gewaschen haben, fügen Sie 50 Mikroliter von jedem der Farbentwickler A und B hinzu. Schütteln Sie die Platte vorsichtig, um sie gut zu vermischen. Dann inkubieren Sie die Platte bei 37 Grad Celsius bei schwachem Licht für 10 Minuten. Pipettieren Sie nun 50 Mikroliter der Stopplösung in jede Vertiefung, um die Reaktion zu beenden.
Messen Sie die Absorption jeder Vertiefung nacheinander bei 450 Nanometern. Die Plasma-Homocystein-Konzentration in der Methionin-Gruppe war doppelt so hoch wie in der Kontrollgruppe. Die Homocysteinkonzentrationen im Plasma waren in den Behandlungsgruppen relativ niedrig.
