Geben Sie zunächst 50 Mikroliter Anti-Maus-CD90.2-Mikrokügelchen zu den isolierten Lungenzellen. Nachdem Sie die Mischung vortexiert haben, inkubieren Sie sie 10 Minuten lang bei vier Grad Celsius. Platzieren Sie als Nächstes eine paramagnetische Zelltrennsäule auf einem Zelltrennmagneten mit einer oder vier Positionen.
Positionieren Sie ein offenes konisches 15-Milliliter-Rohr unter jeder Säule, um den Durchfluss aufzufangen. Grundieren Sie die Säule mit drei Millilitern Kaltsortierpuffer, so dass die Säule durch die Schwerkraft in das darunter liegende konische Rohr abfließen kann. Nachdem die Zellen 10 Minuten lang mit den Mikrokügelchen inkubiert wurden, fügen Sie kalter Sortierpuffer zu einem Volumen von einem Milliliter hinzu und übertragen Sie die Mischung durch ein 100-Mikrometer-Zellsieb, das auf der Säule platziert ist.
Sammeln Sie den Säulenstrom in ein frisches konisches 15-Milliliter-Röhrchen, das sich unter der Säule befindet. Sobald die Zellsuspension vollständig durch die Säule abgeflossen ist, geben Sie weitere drei Milliliter Kaltsortierpuffer in das Originalröhrchen und tragen Sie ihn durch das Netz auf die Säule auf, bevor Sie das Sieb entfernen. Wenn die Probe vollständig in die Säule abgeflossen ist und kein weiterer Durchfluss mehr austritt, nehmen Sie die Säule aus dem Magneten und legen Sie sie auf ein frisches konisches 15-Milliliter-Röhrchen.
Geben Sie fünf Milliliter Kaltsortierpuffer in die Säule. Um die gebundenen Zellen zu eluieren, drücken Sie den Säulenkolben in einer kontinuierlichen Bewegung nach unten und drücken Sie den Puffer aus dem Boden in ein neues Rohr. Zentrifugieren Sie die eluierten Proben bei 400 x g für fünf Minuten bei vier Grad Celsius.
Saugen Sie den Überstand vorsichtig an, wobei etwa 100 Mikroliter des Überstands und des Zellpellets übrig bleiben. Im Durchschnitt werden durch den Anreicherungsprozess mehr als 99 % aller CD90,2-positiven T-Zellen aus der Lunge mit einer Reinheit von mehr als 90 % zurückgewonnen.
