Besorgen Sie sich zunächst die Lysogeny-Brühe oder das LB-Medium und fügen Sie die Antibiotika zum Medium hinzu. Aliquotieren Sie fünf Milliliter des Mediums in sterile Reagenzgläser mit Verschlüssen. Beimpfen Sie das Medium mit Escherichia coli-Stämmen, die Plasmide exprimieren, die aus Tiefkühlbeständen entnommen wurden, und inkubieren Sie die Kultur über Nacht in einem Shaker.
Bereiten Sie als Nächstes eine 10 millimolare Thiophensulfonamidlösung in DMSO vor und wirbeln Sie sie gründlich durch. Die Kulturen werden 1- bis 100-mal in 10 Millilitern Medien zurückverdünnt, die in konischen 15-Milliliter-Röhrchen entnommen werden. Zum Mischen kurz vorziehen.
Geben Sie Kulturen in die entsprechenden Vertiefungen einer 96-Well-Platte. Nach dem Mischen wird eine Verdünnungsreihe von den Reihen A bis E vorbereitet, wobei jeweils 50 Mikroliter der Lösung übertragen werden. Decken Sie die Platte mit mikroporösem Klebeband ab und inkubieren Sie sie.
Nach dem Entfernen des Bandes wird mit einem Plattenleser die optische Dichte bei 600 Nanometern GFP und mCherry abgelesen. Zeichnen Sie abschließend die Daten als normalisierte Fluoreszenz pro Zelle auf und stellen Sie sie grafisch dar. Die Daten für 3-Thiophensulfonamidverbindungen deuteten darauf hin, dass die Verbindungen 1A und 3B jeweils in unterschiedlichem Maße inhibitorisch gegenüber LuxR/HapR waren, während 2B keine Aktivität aufwies.
