Legen Sie zunächst alle sterilen chirurgischen Instrumente auf die Arbeitsplattform. Desinfizieren Sie in der Biosicherheitswerkbank die Oberfläche des Röhrchens, das die zuvor gesammelte menschliche Nabelschnur enthält, mit 75 % Ethanol. Nehmen Sie die Probe in eine Petrischale.
Tauchen Sie die Probe mit den Knoten 30 Sekunden lang in 75%iges Ethanol. Spülen Sie die Probe dann in einer neuen Petrischale mehrmals mit sterilem PBS. Schneiden Sie mit einer chirurgischen Schere und einer Pinzette die Knoten ab und schneiden Sie dann die Schnur zwischen zwei Knoten quer in kurze Stücke.
Perfundieren Sie die Vene mit PBS mit einer Ein-Milliliter-Pipette, bis die Flüssigkeit, die aus dem anderen Ende der Nabelschnur austritt, vollständig transparent wird. Übertragen Sie eines der bereits abgeschnittenen Stücke der Nabelschnur in eine neue Petrischale. Fügen Sie die entsprechende Menge PBS hinzu, um das Kabel während des gesamten Vorgangs feucht zu halten.
Fassen Sie die Nabelschnur mit einer Pinzette und ziehen Sie die Arterien entlang der Längsachse mit Hilfe von Mückenklemmen heraus. Um die Nabelschnur horizontal mit der dickeren Seite nach oben zu fixieren, führen Sie eine Klinge der Pinzette in die Nabelvene ein und klemmen Sie sie fest, wobei Sie sicherstellen, dass die Pinzette auf der dickeren Seite klemmt. Machen Sie mit einem Skalpell einen linearen Schnitt in der Amnionepithelschicht von einem Ende zum anderen entlang der Kante der anderen Klinge der Pinzette.
Heben Sie aus der Ecke des Schnittspalts die Ecke des Amnionepithels mit Zahnklemmen an und schneiden Sie mit einer Hornhautschere horizontal etwas weiter entlang der Innenfläche des Epithels. Trennen Sie das Wharton-Gelee und das Amnionepithel mit Klammern und dehnen Sie sich allmählich auf den gesamten Kreis eines Endes der Nabelschnur aus. Ziehe die Epithelschicht der Länge nach ab.
Führen Sie beide Klingen der Pinzette in die Vene ein. Klemme einen Teil von Wharton's Gelee ein und drehe es dann auf links, um das Epithel der Nabelvene freizulegen. Ziehe das Epithel der Vene leicht ab.
Legen Sie das gesammelte Wharton-Gelee in eine vorbeschriftete 90-Millimeter-Petrischale und schneiden Sie es mit Schere und Pinzette in ein bis drei Millimeter große Stücke. Drehen Sie die Schale mit dem Deckel auf dem Boden um und stellen Sie sie für 30 Minuten in einen 5%igen Kohlendioxid-Inkubator bei 37 Grad Celsius. Wechseln Sie das Kulturmedium für humane mesenchymale Stammzellen alle drei Tage.
Im Vergleich zum herkömmlichen Ansatz zeigte das einzigartige stumpfe Dissektionsverfahren eine signifikante Steigerung der Wharton-Gelee-Ausbeute. Eine weitere Analyse durch Zählung der Gesamtmenge der mesenchymalen Stammzellen von Wharton-Gelee mit beiden Methoden zeigte eine ausgeprägte Lücke in der Zellmenge mit zunehmender Passagenzahl. Die Proliferationsrate von mesenchymalen Stammzellen war bei der neuartigen Methode nach zwei Tagen signifikant höher.
