Befestigen Sie zunächst den Auslegerhalter eines AFM auf dem Ausleger-Wechselständer. Montieren Sie den ausgewählten Ausleger mit einer Uhrmacherzange an der Halterung. Ziehen Sie die Schraube an der Halterung fest, um den Ausleger zu sichern.
Setzen Sie den Auslegerhalter auf den AFM-Kopf, der auf dem Ständer ruht, und verriegeln Sie ihn. Verwenden Sie die Schrittmotorfunktion in der AFM-Software, um den AFM-Kopf auf den höchsten Punkt zurückzuziehen. und legen Sie diese Position auf 0,0 fest.
Heben Sie den AFM-Kopf vorsichtig von seinem Ständer und montieren Sie ihn dann auf dem Probentisch, indem Sie die Beine in die entsprechenden Schlitze stecken. Um den Cantilever zu kalibrieren, verwenden Sie die Schrittmotorfunktion, um ihn nahe an die Probenoberfläche zu bringen. Klicken Sie dann im Fenster Kontaktmodus für Spektroskopie auf Annäherung.
Bringen Sie den Ausleger in kleinen Schritten von 15 Mikrometern nach unten. Drücken Sie die Erfassungstaste, um eine Kraftkurve zu erfassen. Wählen Sie dann die Kraftkurve aus, öffnen Sie sie im Fenster Calibration Manager und wählen Sie im Abschnitt Methode die Option Kontaktbasierter Modus.
Verwenden Sie nun die Funktion Anpassungsbereich auswählen und wählen Sie die Auszugskurve des Auslegers für eine lineare Kurvenanpassung aus. Aktivieren Sie als Nächstes das Kontrollkästchen Empfindlichkeit, um die Krafteinheit von Volt in Newton umzurechnen. Heben Sie den Cantilever-Winkel um 100 bis 200 Mikrometer in der Flüssigkeit an und wählen Sie die Funktion für thermisches Rauschen aus. Klicken Sie erneut auf Select Fit Range und passen Sie die Glockenkurve für thermisches Rauschen an eine Lawrence-Kurve an.
Wählen Sie nach der Kurvenanpassung das Feld Federkonstante K. Vergewissern Sie sich, dass die Federkonstante nahe am Wert des Herstellers liegt, und notieren Sie sie zum späteren Nachschlagen. Legen Sie als Nächstes die auf dem Objektträger montierte Probe der Netzhautgefäße des Nagetierauges oder der subendothelialen Matrix auf den AFM-Tisch und visualisieren Sie die Netzhautgefäße.
Wählen Sie Kontaktmodus für Spektroskopie im Abschnitt Experiment der Software. Stellen Sie dann die Sollpunktkraft auf 0,5 Nanonewton ein und klicken Sie auf Annäherung. Verwenden Sie die Tischschrauben am AFM-Tisch, um die Cantilever-Sonde vorsichtig an einer gewünschten Stelle auf der Probe zu positionieren.
Klicken Sie auf Annäherung, um den Cantilever-Ausleger näher an der Probe zu positionieren, und klicken Sie dann auf Übernehmen, um die Kraftkurven zu erfassen. Speichern Sie abschließend alle Kraftverläufe für die Analyse. Die Annäherungs- und Retraktionskurven aus einer retinalen Kapillare, die von einer diabetischen Maus isoliert wurde, waren steiler als die einer nicht-diabetischen Maus.
