Tauen Sie zunächst ein Fläschchen mit einem Milliliter gefrorener GFP-markierter Zebrafisch-T-ALL-Zellen in einem 37 Grad Celsius warmen Wasserbad unter leichtem Schütteln auf. Pipettieren Sie den Inhalt des Fläschchens langsam in ein konisches 15-Milliliter-Röhrchen, das vier Milliliter Fischmedium auf Eis enthält. Schleudern Sie die Zellen bei 2.500 g für fünf Minuten bei vier Grad Celsius herunter und verwerfen Sie das Supernat, bevor Sie das Pellet in 0,5 Millilitern Fischmedium resuspendieren.
Geben Sie 10 Mikroliter Zellsuspension in das Mikrozentrifugenröhrchen mit 10 Mikrolitern Trypanblau-Farbstoff. Gut mischen und 10 Mikroliter auf ein Hämozytometer geben und die Zellen unter dem Mikroskop zählen. Halten Sie als nächstes den anästhesierten adulten CG1-Zebrafisch mit der Bauchseite nach oben.
Injizieren Sie mit einer Hamilton-Mikrospritze fünf bis sechs Mikroliter Zellsuspension in den intraperitonealen Raum. Etwa 21 bis 28 Tage nach der Transplantation ist der Prozentsatz der GFP-markierten Leukämiezellen aus anästhesierten Zebrafischen zu bestimmen. Um Leukämiezellen zu ernten, bringen Sie den euthanasierten Zebrafisch in eine neue Petrischale und fügen Sie einen Milliliter Fischmedium hinzu, das als Puffer für die Zellen dient.
Mit einer Rasierklinge zuerst den Zebrafisch enthaupten, dann das Gewebe mazerieren. Pipettieren Sie auf und ab, um große Zellklumpen zu entfernen. Geben Sie die Zellsuspension durch ein 40-Mikron-Zellsieb in ein konisches 50-Milliliter-Röhrchen, um in eine Einzelzellsuspension zu dissoziieren.
